果糖-6-磷酸果糖激酶PFK測試盒_糖酵解系列
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
PFK（EC 2.7.1.11）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，負(fù)責(zé)將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。
果糖-6-磷酸果糖激酶PFK測試盒_糖酵解系列
測定原理：
PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PFK活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存，臨用前加入2.8mL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20度保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑三：粉劑×1支，4℃保存，臨用前加入260μL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20度保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑四：液體16μL×1支，4℃保存，臨用前加入260μL蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20度保存，禁止反復(fù)凍融；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為1000~5000：1的比例（建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
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