糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，催化 1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?3-磷酸甘油酸，產(chǎn)生 1 分子 ATP，具有影響 DNA 復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒 RNA 合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
糖酵解系列_3-磷酸甘油酸激酶PGK測(cè)試盒
測(cè)定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 產(chǎn)生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脫氫酶和 NADH 作用下產(chǎn)生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸，340nm 處的吸光度變化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制：
提取液：液體 100mL×2 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加 1 mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 4 mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
酶液提?。?/p>
①總 PGK 酶提?。航ㄗh稱(chēng)取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后 4℃，500g 離心 5min，取上清測(cè)定。②胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液），冰浴勻漿后于 4℃，500g 離心 5min，棄沉淀，取上清在 4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測(cè)定胞漿 PGK 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后 4℃， 500g 離心 5min，取上清測(cè)定葉綠體中 PGK 酶活性。
建議測(cè)定總 PGK 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的 PGK，則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定操作：
1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2.取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 試劑一，20μL 試劑二，10μL 試劑三，10μL試劑四，40μL 試劑五，20μL 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 10s 的吸光值 A1 和 310s的吸光值 A2，△A=A1-A2
環(huán)保在線(xiàn)