脂肪酸代謝系列_磷脂酶C(PLC)測試盒_微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動植物的組織和細胞中,在細胞代謝、細胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。
測定原理:
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基,在410nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
脂肪酸代謝系列_磷脂酶C(PLC)測試盒_微量法
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體102mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。
酶液提?。?/p>
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清:直接測定。