脂肪酸代謝系列_(FC)含量測試盒_微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
FC是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分,也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸等生理活性物質(zhì)的重要原料。FC濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。
脂肪酸代謝系列_(FC)含量測試盒_微量法
測定原理:
FC氧化酶催化FC生成△4-膽甾烯酮和H2O2,過氧化物酶催化H2O2、4-氨基和酚生成紅色醌類化合物,在500nm有吸收峰,其顏色深淺與FC含量成正比。
自備儀器和用品:
水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:異丙醇100mL(自備);
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體40μL×1瓶,4℃保存;
TC標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
FC的提?。?/p>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細(xì)菌、真菌:先收集400-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,加1mL試劑一,超聲波破碎1min(強(qiáng)度20%,超聲2s,停1s),即FC待測液。
3.血清(漿)樣品:直接測定。
測定操作:
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到500 nm。
2. FC工作液的配制:臨用前,吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中,充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中,充分混勻,F(xiàn)C工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:依次在96孔板中加入20μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和180μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管:依次在96孔板中加入20μL FC待測液和180μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
5、空白管:依次在96孔板中加入20μL 試劑一和180μL FC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定
A測定管。
注意事項:
1、 標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。
2、 若測定管產(chǎn)生白色渾濁,可以將待測液用異丙醇稀釋2~5倍后測定,并在后結(jié)果乘以相應(yīng)倍數(shù)。