酰基轉(zhuǎn)移酶AAT測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列分光法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種?；腿ヵ；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。
?；D(zhuǎn)移酶AAT測(cè)試盒_脂肪酸代謝系列分光法
測(cè)定原理：
AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測(cè)定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無(wú)水乙醇。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提?。?/p>
1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3.液體：直接檢測(cè)。
AAT測(cè)定操作：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入45mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無(wú)水乙醇2.5mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。
4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm處吸光值，記為A空白管。
5、 測(cè)定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm處吸光值，記為A測(cè)定管?！鰽=A測(cè)定管- A空白管，空白管只要做一管。
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