脂氧合酶 LOX測試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測定方法:分光光度法
產品規(guī)格:50管/24樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
LOX廣泛存在于動植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應,導致膜脂過氧化。在生物體的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。
脂氧合酶 LOX測試盒_脂肪酸代謝系列_分光法
測定原理:
LOX催化,氧化產物在280nm處有特征吸收峰;測定280nm吸光度增加速率,來計算LOX活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
測定:
1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到280nm,蒸餾水調零。
2. 在試劑三中加入25mL試劑二(振蕩混勻1min),在30℃水浴中預熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。
3. 對照管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL樣本和900μL試劑二,30℃反應30min后,記錄A對照。
4. 測定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL樣本和900μL試劑三,30℃反應30min后,記錄A測定。
5. ΔA=A測定-A對照