脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒_分光光度法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰和丙二酰而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒_分光光度法
測(cè)定原理：
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+沒有；通過測(cè)定340nm 光吸收下降速率，計(jì)算FAS活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解凍后混勻。
試劑二：粉劑×1瓶。臨用前加入1100 μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入1100 μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體50mL×1瓶, 4℃保存。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2100μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
粗酶液提?。?/p>
1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心40min，取上清置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后12000g，4℃，離心40min，取上清置于冰上待測(cè)。
3.血清等液體：直接測(cè)定。
FAS測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑四置于40℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 測(cè)定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、20μL試劑二、20μL試劑三、820μL試劑四和40μL試劑五，迅速混勻后于340nm處測(cè)定吸光值，記錄第30s和90s時(shí)吸光值，分別記錄為A1和A2。△A測(cè)=A1-A2。
環(huán)保在線