人ELISA檢測試劑盒用途
人GLP-1 ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細(xì)胞上清液及各種體液中的GLP-1 。本試劑盒可以檢測天然和重組的GLP-1 。本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。
人ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
人GLP-1 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知GLP-1 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將GLP-1 和*標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中GLP-1 的濃度呈比例關(guān)系。
人ELISA檢測試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48人份酶標(biāo)板 | 1塊板（96T） | 半塊板（48T） | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品：240pmol/L | 1瓶（0.6ml） | 1瓶（0.3ml） | 按說明書進(jìn)行稀稀 |
空白對照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） | 即用型 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶（5ml） | 1瓶（2.5ml） | 即用型 |
*標(biāo)記的抗GLP-1抗體 | 1瓶（6ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶（10ml） | 1瓶（5.0ml） | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶（60ml） | 1瓶（30ml） | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
終止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） | 即用型 |
人ELISA檢測試劑盒自備材料
- 蒸餾水。
- 加樣器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
- 振蕩器及磁力攪拌器等。
人ELISA檢測試劑盒安全性
- 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒有實(shí)驗(yàn)室可*保證此血制品不會(huì)傳染肝炎、AIDS或其它傳染病，依據(jù)當(dāng)?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。
- 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
- 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
- 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人ELISA檢測試劑盒操作注意事項(xiàng)
- 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
- 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
- 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
- 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
- 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
- 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
- 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
- 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
- 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
人ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法
- 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
- 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
- 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
- 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人ELISA檢測試劑盒操作步驟
- 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
- 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
- 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
- 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
- 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
- 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
- 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育15分鐘。避免光照。
- 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
- 在450nm波長處測定各孔的OD值。
人ELISA檢測試劑盒結(jié)果分析
以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的GLP-1 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的GLP-1 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
人ELISA檢測試劑盒局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
人ELISA檢測試劑盒試劑盒性能
- 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
- 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
- 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
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