在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶聯(lián)絡物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發(fā)作氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規(guī)矩的量參與板孔中。每次加標本應更換吸嘴，防止發(fā)作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不可濺起，不可發(fā)作氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規(guī)矩的量參與板孔中。每次加標本應更換吸嘴，防止發(fā)作穿插污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。
在ELISA試劑盒檢查中，質量確保是一個雜亂的進程，很多主要的環(huán)節(jié)都影響到檢查的質量?，F(xiàn)分述如下：
《一》辦法學的影響
ELISA測定模式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競賽抑制法，其間競賽抑制法因受操作時差所導致的競賽等要素的影響，成果重復性較差，質量較難操控。
《二》試劑要素
1.試劑的挑選
免疫檢查的原理均根據(jù)抗原抗體反響。由于該反響進程受多種要素的影響，如普遍存在基質效應、穿插反響等，因而檢查成果難以溯源，不一樣辦法、不一樣試劑之間乃至同一試劑不一樣批號間成果均缺乏可比性。試劑質量在很大程度上決議了檢查的水平，因而在引進新項目之前有必要對試劑進行嚴厲的評估。試劑的評估有以下幾個進程：⑴斷定展開該項意圖必要性;⑵了解該項目現(xiàn)有的檢查辦法和原理;⑶在了解試劑的組成基礎上挑選多家試劑盒進行比較，判別規(guī)范參閱辦法或參閱物質，其次為臨床的滿意度及機構的陳述如各級室間質量評估、CDC陳述等;⑷定期對檢查成果進行追尋反響直至終究認可該試劑。
2.試劑的預備
不一樣批次的ELISA試劑在制作進程中很難確保質量*一致，即使是經(jīng)過批批檢的項目其檢查成果也存在區(qū)別，因而有必要挑選和訂貨長批號的試劑，并確保保留條件。嚴厲執(zhí)行這一規(guī)范能夠防止因試劑批號改動而從頭樹立質控體系及從頭評估試劑的雜亂進程，而且能夠確保成果的穩(wěn)定性;對于效期短、運用率低的試劑，應當小量分裝，每次運用則取分裝有些即可，防止重復凍融形成試劑的失效。
試劑運用前有必要平衡至室溫，否則會影響檢查下限。未用完的室內質控品及本次不需運用的試劑應密封并及時放回冰箱保留。
《三》ELISA試劑盒樣本要素
標本攪擾要素包含內源性攪擾要素和外源性攪擾要素，前者包含類風濕因子、補體、異嗜性抗體、本身抗體、*等，后者包含標本溶血、標本被細菌污染、標本儲存時刻過長、標本凝結不全、冷凍標本的重復凍融等。其間外源性攪擾要素是咱們在檢查進程中能夠防止也是有必要防止的要素，而防止內源性要素的攪擾則主要經(jīng)過挑選適宜的試劑盒。在臨床中遇到罕見的疑問病例時應當考慮到內源性攪擾要素的存在。以下對外源性攪擾要素進行扼要說明：
1.標本溶血 要注意防止呈現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中富含血紅素基團，其具有類過氧化物的活性，因而，在以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)為符號酶的ELISA測定中，假如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育進程中吸附于固相，然后與后邊參加的底物反響顯色。
2.標本被細菌污染 標本的收集及血清別離要注意盡量防止細菌污染。細菌菌體中除也許富含內源酶對測定發(fā)生非特異性攪擾外，還也許對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果。別的標本在保留中呈現(xiàn)污濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢查。
3.標本儲存時刻過長 標本在低溫下保留時刻過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測定中會致使本底加深、乃至呈現(xiàn)假陽性成果。一般情況下血清標本可在2～8℃下保留l周，冷凍保留時刻會更長，但對于抗體或抗原含量低的標本而言，則也許會因抗體掉價、抗原分化而呈現(xiàn)假陰性成果。
4.ELISA試劑盒標本凝結不全 血液一般在收集后半小時后開端凝結，18～24h*凝結。假如在血液未凝結時即離心別離血清，則可因纖維蛋白原非特異吸附于微孔而形成假陽性成果。為了縮短標本處理時刻，能夠在離心前將血液標本置于溫箱中溫育或許選用帶別離膠的*或于*中參加恰當?shù)拇倌齽┮约涌煅宓膭e離。
5.冷凍保留標本防止重復凍融 標本的重復凍暢通領悟因其所發(fā)生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，使抗體效價下跌然后導致假陰性成果，所以測抗體的血清標本如需保留作屢次檢查，宜少量分裝凍存。此外，標本在凍存時會因蛋白質局部濃縮，分布不均，因而從頭融解的標本有必要混勻，但不要進行劇烈振動，重復倒置即可。
按ELISA試劑盒說明書的央求預備實驗中需用的試劑。ELISA試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗刷的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液運用pH計丈量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次實驗不需用的有些應及時放回冰箱保留。
