這類反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后?？沙尸F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的構(gòu)成和，因而試驗(yàn)中有必要加測陰性對照。陰性對照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的目標(biāo)。
目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample，S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值，然后進(jìn)行核算。核算方法有多種，大致可分為陽性斷定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a． 陽性斷定值
陽性斷定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個(gè)特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。
用此法判別成果請求試驗(yàn)條件非常穩(wěn)定，ELSIA試劑盒的制備有必要規(guī)范化，陽性和陰性的對照品應(yīng)契合必定的規(guī)范，須配用精細(xì)的儀器，并嚴(yán)厲按規(guī)則操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過對大量標(biāo)本的試驗(yàn)檢查而得到的?，F(xiàn)舉某種檢查HAg的試劑盒為例。人ELSIA試劑盒中的陰性對照品為不含HAg的復(fù)鈣人血漿，陽性對照品HAg的含量標(biāo)明為P=9lusm2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個(gè)陽性對照和3個(gè)陰性對照。測得A值后，人ELSIA試劑盒先核算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)，兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)有必要大于一個(gè)特定的數(shù)值(例0.400)，試驗(yàn)才有用。3個(gè)陰性對照A值均應(yīng)≥0.5&timeCX，并≤1.5&timeCX，如其中之一超出此規(guī)模，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對照從頭核算NCX；如有兩個(gè)陰性對照A值超出以上規(guī)模，則該次試驗(yàn)無效。陽性斷定值按下式核算：
陽性斷定值=NCX+0.05
標(biāo)本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。
依據(jù)以上敘說能夠看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗(yàn)的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不當(dāng)均會發(fā)生"試驗(yàn)無效"的成果。
b.標(biāo)本/陰性對照比值
ELSIA試劑盒在試驗(yàn)條件(包含試劑)較難確保穩(wěn)定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽性(positive)，而是病人(patient)的縮寫，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測定所沿襲。實(shí)際上每一測定體系應(yīng)該用試驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的ELSIA試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因而，這類試劑盒規(guī)，如lt;0.05(或別的數(shù)值)，則按0.05核算，不然將呈現(xiàn)假陽性成果。
會員1.png)