融合細(xì)胞的篩選,并非所有的細(xì)胞都能融合。細(xì)胞融合本身又帶有一定的隨機(jī)性，除不同親本細(xì)胞間的融合外，還伴有各親本細(xì)胞的自身融合，需設(shè)法把含兩親本細(xì)胞染色體的雜種細(xì)胞分離或篩選出來。
zui簡(jiǎn)便的辦法無疑是應(yīng)用選擇培養(yǎng)基，使親本細(xì)胞死亡，而僅讓雜種細(xì)胞存活下來。為此，已先后利用親本細(xì)胞的藥物抗體、營養(yǎng)缺陷型和溫度敏感性等遺傳標(biāo)記，建立了許多選擇系統(tǒng)，并成功地利用于雜種細(xì)胞的篩選。
現(xiàn)在已分離得到的突變型主要有：藥物抗性突變型，營養(yǎng)缺陷突變型、溫度敏感突變型、紫外線敏感突變型等。
1．藥物抗性突變型
藥物抗性突變型：細(xì)胞突變后對(duì)某一種藥物的抗性顯著增加而形成的一種突變型。某一種藥物在達(dá)到一定濃度時(shí)，可以殺死野生型細(xì)胞。當(dāng)把正常的野生型細(xì)胞培養(yǎng)在含有這一藥物的培養(yǎng)基上，逐漸增加藥物濃度，便可得到一條存活曲線。但是存在一些自發(fā)突變，這一細(xì)胞在藥物的致死濃度中仍能生長。
2．營養(yǎng)缺陷突變型
營養(yǎng)缺陷突變型是培養(yǎng)細(xì)胞突變型中的另一種重要突變類型。這些突變型表現(xiàn)在合成低分子量代謝物(如氨基酸，嘌呤、嘧啶等）的能力發(fā)生了改變，以致這些細(xì)胞所產(chǎn)生的生物量不能滿足正常生長的需要。 例如：氨基酸依賴型，嘌呤代謝缺陷型，嘧啶生物合成營養(yǎng)突變型，嗜糖性突變型等。目前已分離得到許多與氨基酸、嘌呤、嘧啶等生物合成代謝有關(guān)的酶缺陷營養(yǎng)突變型。這些突變型的發(fā)現(xiàn)，不僅可用于研究不同生化途徑中的生物合成過程和代謝調(diào)節(jié)作用，而且還能用來作為體細(xì)胞遺傳學(xué)分析中的遺傳標(biāo)記。
3．由營養(yǎng)缺陷變異型細(xì)胞組成的
雜種的選擇：營養(yǎng)缺陷型是指，在一些營養(yǎng)物(如氨基酸、碳水化合物、嘌呤、嘧啶或其他代謝產(chǎn)物)的合成能力上出現(xiàn)缺陷，而難以在缺乏這些營養(yǎng)物的培養(yǎng)基中存活的變異型細(xì)胞。可按反選擇法分離所需細(xì)胞。由不同營養(yǎng)缺陷變異型細(xì)胞生成的雜種，像抗藥性細(xì)胞的雜種一樣，可用適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)基來進(jìn)行篩選。
4．由溫度敏感突變型細(xì)胞組成的雜種的篩選：
培養(yǎng)的哺乳類細(xì)胞，均可在32℃到40℃之間的范圍內(nèi)生長，其zui適溫度則為37℃ 。但用篩選營養(yǎng)突變型細(xì)胞的類似方法，也可分離得到不能在38～39℃ (非許可溫度)生長的溫度敏感突變型細(xì)胞。要盡可能快地鑒定處帶有所需表型的細(xì)胞克隆。zui長用的方法就是根據(jù)所需的特點(diǎn)來鑒定或選擇細(xì)胞克隆。
會(huì)員1.png)