過去十年間，科學(xué)家們花費(fèi)數(shù)十億美元完成了人體、土壤和海洋等不同地點(diǎn)的微生物的分類歸總，通過日益的新一代測序技術(shù)，我們對(duì)這些差別甚大的微生物有了更多的認(rèn)識(shí)，比如說，對(duì)細(xì)菌核糖體小亞基 16S rRNA 編碼基因進(jìn)行高通量測序，科學(xué)家們能了解樣品中的微生物多樣性。此外還可以選擇鳥*宏基因組學(xué)作為互補(bǔ)技術(shù)，分析樣品中所有生物的所有基因。這些DNA測序技術(shù)十分敏感，也能識(shí)別樣品污染和危害樣品處理引發(fā)的細(xì)微變化。

由于處理和存儲(chǔ)樣品的變化會(huì)影響研究結(jié)果，因此要想維持在現(xiàn)場收集樣品的完整性也是微生物研究中的一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。即使是微生物菌群zui小的變化或者相對(duì)豐度改變，也會(huì)*的干擾群體比對(duì)，因此儲(chǔ)存方法引起的變化越小越好。以下是The Scientist雜志*的一些樣品保存技巧。

如果只是計(jì)劃分析核酸組成，那么選擇更多。就這種類型的研究而言，在儲(chǔ)存樣品前可以將其加入到一種裂解緩沖液中。雖然很少有研究比對(duì)不同的低溫凍存保護(hù)劑在維持原始樣品多樣性方面的作用，但是目前的證明表明，低溫凍存保護(hù)劑會(huì)在不同程度上影響不同微生物物種的構(gòu)成。

關(guān)鍵在于選擇一種可靠，并且適合你的研究的方法，同時(shí)也要注意到其潛在的誤差。 總的說來，研究人員已經(jīng)發(fā)現(xiàn)加入一種低溫凍存保護(hù)有助于人體樣品的保存。Ganz指出，在比較儲(chǔ)存樣品和新鮮樣品中的微生物組成之前，可以采用一種快速的方法，來評(píng)估保護(hù)劑的作用，那就是檢測一下樣品DNA的量，如果DNA量不足，那么你采用的方法也許并不適用于這種微生物的保存。

Heylen采用了一種混合溶劑：二甲基亞砜（DMSO）與海藻糖，*大豆肉湯（Tryptic Soy Broth， TSB），這能用于保持三種不同微生物組系統(tǒng)冷凍樣品的保真性。海藻糖能防止細(xì)胞干燥，TSB也是一種低溫凍存保存劑，專家建議在將這一溶液加入到樣品中之前，先放置到4°C中，然后再與樣品混合，保存到超低溫冰箱里去。如果無法放到−80°C冰箱，那么也可以用家用冰箱，但是樣品要盡可能早的凍存，而且需要加入低溫凍存保護(hù)劑。

RNAlaterzui初是作為一種RNA保存劑，現(xiàn)在可以用于保存DNA。RNAlater是特殊的樣品儲(chǔ)存液，只要在采樣后立即將新鮮樣品浸入這種液體試劑，RNlater可以迅速滲透到組織或其他生物樣本中，穩(wěn)定并保護(hù)RNA完整而不被降解，確保下游分析得到的數(shù)據(jù)真實(shí)反應(yīng)樣品的表達(dá)信息。樣品儲(chǔ)存液中保存的新鮮樣品可以在不超過37度的高溫天氣下保存一天，或者在25度室溫下保存一周；或者4度冰箱存放一個(gè)月；或者負(fù)20度*保存而使RNA保持完整免受降解。這種技術(shù)為在不同溫度和不同地點(diǎn)下的采樣、運(yùn)輸和保存樣品提供了*的方便，同樣適合手術(shù)/解剖過程中部分樣品的保存。

人類微生物組計(jì)劃(Human Microbiome Project)的參與研究人員，來自哈佛大學(xué)的計(jì)算生物學(xué)家Curtis Huttenhower與他的同事們發(fā)現(xiàn)在樣品收集后，如果沒有冰箱，那么可以加入這種保護(hù)劑使用。不過一些用戶也報(bào)告了RNAlater的缺陷，雖然RNAlater不可燃，因此可以用于樣品運(yùn)輸，但是這種保護(hù)劑會(huì)降低Bacteroidetes 和 Ruminococcaceae 兩種細(xì)菌新鮮提取后的菌群數(shù)量。另外就是如果想獲得樣品高RNA產(chǎn)量，那么就必須先將其去除。RNAlater會(huì)妨礙樣品正常形成顆粒沉淀，因此在去除RNAlater之后，還必須磷酸鹽緩沖液進(jìn)行清洗。

此外，Woods Hole海洋研究所海洋生物化學(xué)家Mak Saito也指出，RNAlater還有一個(gè)問題，那就是其高鹽含量，因此在一些實(shí)驗(yàn)中會(huì)令樣品清洗成為問題。Saito曾采用這種溶液保存海洋微生物組中的蛋白組成。在室溫下，也能在超過8周的時(shí)間里穩(wěn)定地保存糞便樣品中的微生物菌落結(jié)構(gòu)。但是乙醇是可燃的，因此不能用于樣品運(yùn)輸，還有更重要的是，添加乙醇的低溫凍存保護(hù)劑會(huì)導(dǎo)致Cyanobacteria比新鮮采集時(shí)的樣品，數(shù)量增加。“所有這些儲(chǔ)存方法都存在偏差，因此研究過程中需要保證保存方法的一致性，”Ganz說，她的同事就建議她將貓糞便樣品保存70%的乙醇中。