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組織細胞總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法)
細胞樣品的準備:收集新鮮細胞(如果是貼壁細胞,請用細胞刮刮下,不宜使用胰酶和EDTA消化),PBS洗滌細胞一次,離心收集細胞,吸盡上清。加入200μl預冷的組織細胞裂解液,超聲破碎細胞釋放其中的抗氧化物。4℃,10000g離心10分鐘。取上清用于總抗氧化能力的測定。不立即測定的樣品可以-70℃保存。如果樣品中總抗氧化能力超出測定范圍,可利用組織細胞裂解液適當稀釋后測定,稀釋倍數請通過預實驗確定。
組織樣品的準備:取20mg組織,加入400μl的預冷的組織細胞裂解液,用勻漿器冰浴勻漿。4℃,10000g離心10分鐘。取上清用于總抗氧化能力的測定。不立即測定的樣品可以-70℃保存。如果樣品中總抗氧化能力超出測定范圍,可利用組織細胞裂解液適當稀釋后測定,稀釋倍數請通過預實驗確定。
總抗氧化能力檢測工作液的配制:按比例混合ABTS溶液和氧化劑溶液,室溫避光放置6小時;然后利用PBS稀釋30-50倍,測定A734nm,根據吸光度值調整稀釋倍數,至吸光度A734nm為0.7±0.05,即為總抗氧化能力檢測工作液。
利用標準品濃度為橫坐標,吸光度值為縱坐標制作Trolox抗氧化能力標準曲線,并獲得橫縱坐標之間的函數關系式,然后利用各樣品的吸光度值計算樣品的總抗氧化能力。對于細胞和組織樣品,可以根據樣品中蛋白濃度測定,計算每毫克蛋白中總抗氧化能力。
組織細胞總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法)
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