犬鐵蛋白（FE）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：
96T
10ng/ml-320ng/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵蛋白（FE）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中犬鐵蛋白（FE）水平。用純化的犬鐵蛋白（FE）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鐵蛋白（ FE），再與   HRP標(biāo)記的鐵蛋白（FE）抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵蛋白（FE）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在  450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中犬鐵蛋白（FE）濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標(biāo)試劑
標(biāo)準品（640ng/ml）     0.5ml×1瓶
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標(biāo)準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
犬鐵蛋白（FE）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
320ng/ml
160ng/ml
80ng/ml
40ng/ml
20ng/ml
5號標(biāo)準品
4號標(biāo)準品
3號標(biāo)準品
2號標(biāo)準品
1號標(biāo)準品
150µl的原倍標(biāo)準品加入  150µl標(biāo)準品稀釋液
150µl的  5號標(biāo)準品加入  150µl標(biāo)準品稀釋液
150µl的  4號標(biāo)準品加入  150µl標(biāo)準品稀釋液
150µl的  3號標(biāo)準品加入  150µl標(biāo)準品稀釋液
150µl的  2號標(biāo)準品加入  150µl標(biāo)準品稀釋液
犬鐵蛋白（FE）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液：將 20倍濃縮洗滌液用蒸餾水  20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液    50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，