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量細(xì)胞基因多位點(diǎn)檢測(cè)方法

時(shí)間:2015-5-25閱讀:269
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    研究結(jié)果表明,所采用的全基因組放大方法保真性高,經(jīng)過(guò)分選的胃癌細(xì)胞中SNP位點(diǎn)的檢測(cè)靈敏度和可靠性大為提高。所建立的少將同樣應(yīng)用于其它腫瘤和組織的少量細(xì)胞研究中,全基因組放大產(chǎn)物也可進(jìn)行高通量的基因芯片和第二代測(cè)序研究。隨著基因組關(guān)聯(lián)分析方法的應(yīng)用,越來(lái)越多與胃癌相關(guān)的易感基因被發(fā)現(xiàn),易感基因的多態(tài)性檢測(cè)已逐步進(jìn)入胃癌臨床診斷和研究。

    然而,利用少量胃粘膜細(xì)胞開展單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析對(duì)胃癌進(jìn)行早期診斷常遇下述困難,一是少量胃癌細(xì)胞混雜在多種細(xì)胞中,異常信號(hào)常易被淹沒(méi),二是細(xì)胞量極少,因此獲得的基因組DNA量微,進(jìn)行多位點(diǎn)或全基因組分析存在困難。本文利用激光顯微切割技術(shù)分選少量胃癌細(xì)胞,結(jié)合全基因組放大技術(shù),進(jìn)行胃癌相關(guān)的前列腺干細(xì)胞抗原基因(PSCA)的SNP分析。通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)和克隆測(cè)序方法分析,在分選的胃癌細(xì)胞中檢測(cè)到PSCA的rs2976392位點(diǎn)胃癌相關(guān)的“A"等位與rs2294008位點(diǎn)胃癌相關(guān)的“T"等位。

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