人巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)AmAELISA試劑盒
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卡邁舒化學(xué)技術(shù)(上海)有限公司
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產(chǎn)品型號
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更新時(shí)間:2015-05-07 14:36:06瀏覽次數(shù):127次
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牛乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
牛乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為陰性
陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為陽性
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