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人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)elisa試劑盒廠家技術

時間:2015-4-22閱讀:203
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本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)水平。用純化的
人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次
加入糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c),再與HRP 標記的糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)抗體結合,
形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖化血紅蛋白
A1c(GHbA1c)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計
算樣品中人糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)濃度。

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樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固10-20 分鐘,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20 分鐘后,
離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再
次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中
如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/
分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃
度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分鐘
2
左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?BR>用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將
標本勻漿充分。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,
其余冷凍備用。

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