小鼠3-磷酸甘油脫氫酶ELISA試劑盒操作方法實(shí)驗(yàn)原理：
   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）水平。用純化的小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中順次參加3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH），再與HRP符號的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）抗體，構(gòu)成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的效果下轉(zhuǎn)化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品中的3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）呈正有關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），經(jīng)過規(guī)范曲線核算樣品中小鼠3-磷酸甘油脫氫酶（GPDH）活性濃度。
樣本處理及請求：
1. 血清：室溫血液天然凝結(jié)10-20分鐘，離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保留過程中如呈現(xiàn)沉積，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的請求挑選EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保留過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)當(dāng)再次離心。
3. 尿液：用無菌管搜集，離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清，保留過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢查排泄性的成份時(shí)，用無菌管搜集。離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。檢查細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度到達(dá)100萬/ml擺布。經(jīng)過重復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保留過程中如有沉積構(gòu)成，應(yīng)再次離心。
5. 安排標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取分量。參加一定量的PBS，PH7.4。用液氮敏捷冷凍保留備用。標(biāo)本消融后仍然堅(jiān)持2-8℃的溫度。參加一定量的PBS（PH7.4），用手藝或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘擺布（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。分裝后一份待檢查，其他冷凍備用。
6. 標(biāo)本收集后盡早進(jìn)行獲取，獲取按有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，獲取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立刻進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保留，但應(yīng)避免重復(fù)凍融.
7. 不能檢查含NaN3的樣品，因NaN3按捺辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠3-磷酸甘油脫氫酶ELISA試劑盒操作方法操作過程：
規(guī)范品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔10孔，在、第二孔平別離加規(guī)范品100μl，然后在、第二孔中加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl別離加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl別離加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔平別離加規(guī)范品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl別離加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔平別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔平別離取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔別離加規(guī)范品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度別離為1200U/L，800U/L ，400U/L，200U/L， 100U/L）。
加樣：別離設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作一樣）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗刷液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50μl，空白孔在外。
溫育：操作同3。
洗刷：操作同5。
顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
小鼠3-磷酸甘油脫氫酶ELISA試劑盒操作方法注意事項(xiàng)：
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保留。
濃洗刷液也許會有結(jié)晶分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果。
各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其準(zhǔn)確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)刻控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，引薦運(yùn)用排槍加樣。
請每次測定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于規(guī)范品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時(shí)請zui終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免穿插污染。
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月