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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)如下
檢測(cè)成果牢靠的必要條件。如不留意,就易呈現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽(yáng)性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔成果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻顯著偏高)是各個(gè)廠家洗板機(jī)調(diào)試中常常遇到的問(wèn)題。以期給我們帶來(lái)一些啟發(fā),以改進(jìn)洗板機(jī)的裝置調(diào)試水平,進(jìn)步臨床檢測(cè)質(zhì)量。也有廠家堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度,科學(xué)地對(duì)待反響成果。
基因工程抗原較組成肽抗原有*的*性,就HCV-ELISA 試劑盒來(lái)講,ELISA試劑盒靠前代產(chǎn)品為組成肽抗原,主要是HCV特異性抗原決定簇的肽片段;第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工程抗原又有組成肽,僅僅其時(shí)的基因工程抗原不全,僅包含了HCV 的核心區(qū)片段;第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原,并且這些抗原包含更多、更安穩(wěn)、純度更高的HCV 特異性抗原。第三代試劑的敏感度大大進(jìn)步了。
基因工程抗原與組成肽抗原的差異如下:
a,要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過(guò)氧化物的活性,因而,在以HRP為符號(hào)酶的ELISA試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。
b,冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等造成的重復(fù)凍融。ELISA試劑盒標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性成果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意,不要進(jìn)行劇烈振動(dòng),重復(fù)倒置混勻即可。
c,樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的成長(zhǎng),其所排泄的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分解效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定辦法發(fā)生非特異性干擾。
d,血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長(zhǎng)期保存,應(yīng)在-70℃以下。
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