當前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術文章>>影響胎牛血清質量的幾大因素
市場上的胎牛血清品種繁多,魚龍混雜,許多科研工作者,特別是剛接觸細胞培育的人,難以分辨血清質量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來血清出產出售的經驗,總結如下:
一、外觀
1、色彩
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或赤色,我國的細胞培育用血清規(guī)范是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的凹凸對血清并無直接影響,這個目標的含義在于能體現(xiàn)出采血進程的謹慎規(guī)范程度,良好的操作能下降血清的溶血。國產血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后立刻離心搜集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產血清也很少有規(guī)范含義上的胎牛血清。進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真實的胎牛血清凝血功能差,紅細胞簡單破裂。
總的來說,國產的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質量的呈現(xiàn)出談黃、微赤色,如Gibco 16000,差點的呈現(xiàn)出橘赤色或鮮赤色。當然,熱滅活血清或保存不當?shù)难?,因為血紅蛋白的損壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。
2、沉積
許多血清客戶,會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉積,然后置疑血清的質量問題,這是沒有根據(jù)的。血清中的沉積是由纖維蛋白的凝集發(fā)生,對血清質量沒有任何影響,沉積的發(fā)生原因許多,和廠家的加工出產方式密切相關。國產的血清,大多來自北方,因為價格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運輸?shù)匠霎a會經過屢次凍融,每次凍融進程,就會分出部分纖維蛋白沉積,這樣,血清制品過濾后看起來反而愈加的“干凈”,很少有沉積發(fā)生。
進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,出產后的制品也是明澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會分出形成沉積。當然,進口的重生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量顯著偏高,出產后血清可能會污濁,甚至有大量沉積。
3、弄清度
進口胎牛血清因為蛋白和脂類等物質含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國產血清,因為絕大多數(shù)是重生牛血清,相對而言愈加粘稠,色彩略深,這對于開始接觸血清的人很難判別,但把兩者進行比照,可簡單分辨。
二、首要技術目標
現(xiàn)在國內血清的質量規(guī)范是2005版的《中華人民共和國藥典》,首要目標有以下幾點:
1、內毒素
規(guī)范為不高于5EU/ml。內毒素是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內毒素含量的凹凸可表現(xiàn)出采血到出產一系列進程中的無菌操作狀況?,F(xiàn)在,國產血清根本都能到達這一要求,許多進口胎牛血清內毒素含量反而更高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我國規(guī)范10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清質量也未見影響??梢姡瑑榷舅睾科卟挥绊戀|量,除非含量*,預示著現(xiàn)已污染。
2、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,闡明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,標明血清可能摻水了。
3、血紅蛋白
規(guī)范為不高于20mg/dl,色彩越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。
4、pH
國產血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因不知道,可能和牛齡有關,這也能用來開始鑒別血清的來歷。
5、微生物
包含細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性等。隨著國內血清廠家出產條件的改進提高,細菌、霉菌等“大型”微生物簡直能100%操控,支原體經過0.1um過濾,大多也能鏟除。大腸桿菌噬菌體的污染仍是比較嚴峻的,首要是出產環(huán)境進程中帶入,又無法過濾,很難*鏟除,但對血清質量影響不大。特別是BVDV,在國產血清中簡直90%以上都存在,這類微生物是影響國產血清質量的重要因素之一,而進口胎牛血清中根本都操控的很好。
6、免疫球蛋白
國產血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時的牛齡狀況,國產血清,根本都是重生牛的,血清中簡單發(fā)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。
7、其它
不管是國產仍是進口血清,都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血鏟在外)。國外,抗生素的運用很嚴厲,用量也很少,每頭奶牛的產品包含血清都能夠溯源的,因此能夠做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內,抗生素的亂用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對細胞培育極為晦氣,這是國產血清質量差的根本原因。
三、血源
市場上的血清血源首要分為我國、北美、南美和澳洲。
1、國產血清質量差,這是*的,首要原因并不是出產廠家的職責,而是天然環(huán)境差和抗生素的大量運用。國內環(huán)境污染嚴峻,一起養(yǎng)殖進程中抗生素極其亂用,有毒有害物質會大量殘留在血清中,zui終晦氣于細胞的成長。
2、南美血清,來歷許多,如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等,這些血清因為采血的不可控性,質量參差不齊,當然,相對于國內血清來說好的多。另外,國內出售的南美血清大多色彩鮮紅,如Bioind、Gibco、Hylone等品牌,但阿根廷的血清例外,這可能和各國的采血、出產工藝有關。
3、北美血清,首要來自美國和加拿大,如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清,等級越高的色彩越淡,表現(xiàn)為淡黃中帶一點微紅,SH30070和SH30396比照就很顯著,特級胎牛血清根本就能進行干細胞培育。北美血清還有一個顯著特點就是每瓶血清都能溯源,這對一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。
4、澳洲血清,來歷首要是新西蘭和澳大利亞,這是在北美血清禁運之后進入我國市場的,一般不具有溯源功能,因為出產、運輸?shù)仍?,價格相對來說比較貴。拿Gibco的10099和16000相比較,后者質量等級更高,色彩更淡,性價比更高。
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