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上海酶聯(lián)生物研究所

組織培養(yǎng)過程

時(shí)間:2016-5-19閱讀:129
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組織培養(yǎng)過程中,外植體生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子,主要是由培養(yǎng)基供應(yīng)的。因此,培養(yǎng)基中應(yīng)包括植物生長(zhǎng)必需的16種營(yíng)養(yǎng)元素和某些生理活性物質(zhì)。所有這些物質(zhì),可概括為5大類:
1.無機(jī)營(yíng)養(yǎng)物
植物生長(zhǎng)必須的有13種元素:氮(N)、磷(P)、鉀(K)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、硫(S)、鐵(Fe)、硼(B)、錳(Mn)、銅(Cu)、鋅(Zn)、鉬(MO)、氯(Cl)。前六種屬大量元素,后七種屬微量元素。培養(yǎng)基的各種鹽類中均含有上述這些元素。無機(jī)氮可以兩種形式供應(yīng),即硝態(tài)氮和銨態(tài)氮。有些培養(yǎng)基以硝態(tài)氮為主,另一些以銨態(tài)氮為主,多數(shù)二者兼而有之。
鐵往往以無機(jī)鐵供應(yīng),如*,為了防止沉淀,目前皆用螯合鐵,即*加乙二胺四乙酸鈉配成。

2.有機(jī)物質(zhì)
主要有兩類:一是作為有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),為植物細(xì)胞提供碳、氫、氧、氮等必要元素,如糖類(蔗糖、葡萄糖和果糖)、氨基酸及其酰胺類(如*、天*、*);另一類是一些生理活性物質(zhì),在植物代謝中起一定作用,如硫胺素(B1)、吡哆醇(B6)、*、*、肌醇、單核甘酸及其堿基(如腺嘌呤等)。

3.主要加入植物天然的五類激素物質(zhì)及其人工合成的類似生長(zhǎng)激素物質(zhì),如生長(zhǎng)素中常用的吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、吲哚丁酸;細(xì)胞分裂素中常用的有激動(dòng)素、6-芐基氨基嘌呤、玉米素;赤霉素類中常用的有赤霉酸;乙烯類中常用的有乙烯和乙烯利。

 4.其他附加物
這些物質(zhì)不是植物生長(zhǎng)所必需的,但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有益。瓊脂(agar)是固體培養(yǎng)基的必要成分,瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物,本身并不提供任何營(yíng)養(yǎng)。瓊脂能溶解在熱水中,成為溶膠,冷卻至40℃即凝固為固體狀凝膠。通常所說的“煮化"培養(yǎng)基,就是使瓊脂溶解于90℃以上的熱水。瓊脂條的用量在6—10g/L之間,瓊脂粉的用量在3—4g/L之間若濃度太高,培養(yǎng)基就會(huì)變得很硬,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)難以擴(kuò)散到培養(yǎng)的組織中去。

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