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ELISA試劑盒*或親和素與抗體分子或標記物結(jié)合后,既不影響前者的親和力,也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的*殘基結(jié)合,剩下的游離部位尚可作為另一種*標記蛋白質(zhì)的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術(shù)的基礎(chǔ)和原理。
ELISA試劑盒BAS基本檢測方法可分為兩大類,一類以游離親和素居中,分別連接*化大分子反應(yīng)體系和標記*,稱為BAB法或橋聯(lián)親和素*法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法稱為(avidinbiotin complex,ABC)法。另一類以標記親和素連接*化大分子反應(yīng)體系,稱為BA法或標記親和素和*法(LAB)。現(xiàn)分別介紹如下:
1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體*化,將酶分子標記在親和素分子上,*化抗體與被檢抗原結(jié)合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上,經(jīng)酶促反應(yīng)即可檢出抗原。
2.BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體*化,將酶分子標在*上,然后以游離親和素橋聯(lián)物,使被檢抗原、*化抗體和酶標*聯(lián)成一體。
3.ABC法原理與BAB法基本相同,只是親和素和酶標*需要先按一定比例形成ABC復(fù)合物,這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了大量的酶分子,當親和素尚未被酶標*飽和時,*化抗體即可與之結(jié)合。BASELISA的三種基本檢測法。
ELISA試劑盒上述方法中,如將第二抗體*化,即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應(yīng),因而比直接法更敏感,應(yīng)用范圍更廣。近年來許多學(xué)者對上述基本方法進行了改良,有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯(lián)物。另外還發(fā)展了BAELISA競爭法和抑制法等。
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