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ELISA試劑盒酶免疫測定(enzymeimmunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進行游離的和的符號物的別離而直接測定符號物。ELISA試劑盒例如在某種條件下,抗原抗體反響后形成的酶符號抗原抗體復(fù)合物中的酶失掉其對底物效果的生機,因而測出的酶生機直接反映游離的酶符號物。
均相EIA在查驗中較少使用。非均相EIA需*行游離的和的符號物的別離。如前所述,固相載體可用作一種別離手法。這種固相酶免疫測定辦法在1971年開始建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinked immunosorbent assay),簡稱ELISA,在國內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫吸附實驗的,盡管意義不*切當,但已慣用。如上所述,免疫測定是一種很靈敏的測定辦法,抗原抗體反響后直接測定形成的沉積或濁度,靈敏度可達5~10μg/ml,但在臨床查驗中,某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平,因此要尋覓添加靈敏度的辦法。
ELISA試劑盒符號的免疫測定是將檢查試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以符號,通過測定符號物來進步靈敏度。在放射免疫測定和酶免疫測定中,符號物分別為放射性核素和酶,zui后用測定放射性和酶生機來核算待檢物的量,靈敏度可比直接測定沉積物進步數(shù)百至數(shù)千倍??墒沁@種特異性也不是的。倘若兩種化合物有著有些一樣的構(gòu)造,ELISA試劑盒在抗原抗體反響中可出現(xiàn)穿插反響。例如:絨毛膜*(hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成,其構(gòu)造的不一樣處在β亞單位,而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體,抗α-hCG抗體將與LH中的
α酶位發(fā)作穿插反響。在臨床查驗中,如用抗hCG抗血清作為確診試劑檢定尿液中hCG,只能用于hCG濃度較高的實驗,不然婦女生理性排泄入尿液中的微量LH將與之發(fā)作穿插反響。因此在作為早孕確診(靈敏度應(yīng)到達50mIu/mlhCG)的實踐中有必要使用只對hCG特異的抗β-hCG,以避免與其它激素的穿插反響的發(fā)作。
在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學(xué)比色法的靈敏度為mg/ml水平,酶反響測定法的靈敏度約為5~10μg/ml,免疫測定中凝膠分散法和濁度法的靈敏度與酶反響法相仿。符號的免疫測定的靈敏度可進步數(shù)千倍,達ng/ml水平。例如,用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg,其靈敏度可達0.1ng /ml。
ELISA試劑盒因為各種抗原成份,包含小分子的半抗原,均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體,使用此抗體作為試劑就可檢查標本中相應(yīng)的抗原,ELISA試劑盒因此免疫測定的使用范圍極廣,在臨床查驗中可用于測定:
1) 體液中的各種蛋白質(zhì),包含含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2) 激素,包含小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原,HBsAg、HBeAg等。
5) 別的,也可使用純化的抗原檢查標本中的抗體,例如抗-HBs等。
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