ELISA試驗的原理好像很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉?？墒?，即使是平鋪直敘的洗刷和關(guān)閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個試驗。在試驗結(jié)束時，我們是否能取得有意義的信息，ELISA試劑盒這在很大程度上取決于成果的信噪比。ELISA試劑盒布景噪音會影響您對成果的判斷。怎么下降ELISA的布景，上海酶聯(lián)生物研究所教你辦法。

一、洗刷很重要

1. 洗刷過程看似很無聊，其實很重要，由于如果未結(jié)合的材料（如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會阻撓非特異結(jié)合反響。如果布景過高，而您置疑洗刷不行時，能夠測驗添加洗刷次數(shù)。

關(guān)閉更重要

2. 關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就下降了可發(fā)作信號的抗體非特異結(jié)合的時機(jī)。您當(dāng)然也期望抗體只與意圖蛋白結(jié)合吧。如果您的布景過高，置疑關(guān)閉不充分，那么您能夠測驗運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延長關(guān)閉時刻。

如果您一直被布景問題所困擾，那么或許您該花些時刻來優(yōu)化關(guān)閉液。這可能需求時刻，但也是值得的?，F(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運(yùn)用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)作相互作用。

3. ELISA試驗zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關(guān)閉液廉價、安穩(wěn)，在去除洗刷過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，ELISA試劑盒由于很簡單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要添加關(guān)閉液。請勿運(yùn)用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會下降特異結(jié)合，發(fā)作假陰性。另一個挑選是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，后者可協(xié)助洗刷過程中的關(guān)閉。

4. 蛋白關(guān)閉液則有所不同，是*的。它們與敞開位點結(jié)兼并關(guān)閉，一起安穩(wěn)與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白關(guān)閉液包含牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有用阻攔許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個問題的一種辦法是運(yùn)用雞或魚的正常血清。

二、抗體濃度須優(yōu)化

ELISA試驗我們通常會follow師兄師姐留下來的操作過程，ELISA試劑盒可是如果試劑稍有不同，則可能需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會添加布景。為了避免這一點，切勿運(yùn)用過多的一抗或二抗。

三、檢測試劑要適量

另一點也很清楚明了：切勿運(yùn)用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)參加停止液。

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