免疫分析，比如ELISA試劑盒，一般包含兩個(gè)或以上的孵育進(jìn)程，中心以洗刷離隔。ELISA一般在96孔板中展開，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉進(jìn)程后，包被后的平板首要與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗刷進(jìn)程去除未結(jié)合（低親和力）的抗原-抗體復(fù)合物。接著，平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。之后，又是一輪洗刷。畢竟是增加底物并檢測信號(hào)。

我們可運(yùn)用多種底物來檢測畢竟的抗原-抗體復(fù)合物。底物分為三類：天然發(fā)光、化學(xué)發(fā)光和熒光。準(zhǔn)確說來，ELISA這個(gè)詞指的是運(yùn)用天然發(fā)光底物的分析。而運(yùn)用化學(xué)發(fā)光底物的分析被稱為Luminescent Immunoassay（LIA），運(yùn)用熒光二抗的分析被稱為Fluorescent 

優(yōu)化ELISA的關(guān)鍵之一在于洗刷。洗刷進(jìn)程可下降未結(jié)合抗體所引起的布景信號(hào)，然后增加分析的信噪比。每一步之間的洗刷保證只需特異的結(jié)合事情被保存，在畢竟一步發(fā)作信號(hào)。而不充分的洗刷會(huì)導(dǎo)致差異和高布景，然后帶來不志向的效果。本文將為你介紹一些運(yùn)用自動(dòng)洗板機(jī)來洗刷ELISA平板的技巧。

洗刷參數(shù)
一些參數(shù)會(huì)影響洗刷進(jìn)程的效果。*個(gè)首要的參數(shù)是洗刷量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗刷液。如果你之前遭受過高布景，那么不要猶疑，將洗刷量調(diào)為高，是比包被體積更高。太少的洗刷液會(huì)讓一部分分析表面洗刷不到，然后明顯增加布景。全部反應(yīng)孔的洗刷量有必要相同。ELISA板的制造商一般會(huì)在試劑盒的運(yùn)用手冊中列出包被量。工作中一般運(yùn)用的包被量是200 µl。如果你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會(huì)建議運(yùn)用300 µl進(jìn)行洗刷，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗刷量越高，則孵育進(jìn)程殘留的抗體或抗原量就越少。

洗刷次數(shù)的閱歷規(guī)律
ELISA試劑盒第二個(gè)影響洗刷效果的首要參數(shù)是洗刷循環(huán)的量。當(dāng)然，洗刷次數(shù)越多，布景越低?？墒?，太多次的洗刷會(huì)下降信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測定。一般的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗刷三次。不過，ELISA板的制造商會(huì)對(duì)洗刷次數(shù)提出建議。一般而言，制造商包被平板需求的洗刷次數(shù)比用戶包被的平板要少。關(guān)于用戶包被的ELISA板，有必要優(yōu)化洗刷次數(shù)。

控制洗刷量和洗刷次數(shù)的另一種方法是參加過量的洗刷液。一般來說，96孔板的每個(gè)孔能包容330至460 µl。不過，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗刷液，比如1 ml。它是怎樣做到的呢？其實(shí)很簡單，就是在分液的一起翻開吸液功用。換句話說，跟著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗刷量，但不會(huì)溢出到其他孔中。

其他，還有一些參數(shù)會(huì)影響洗刷進(jìn)程的效果。這些參數(shù)包含吸液高度和吸入方位，這兩者都能調(diào)整，以下降布景（殘留量）和差異。殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加布景信號(hào)。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的煩擾液體也就越少。

吸液高度會(huì)明顯影響殘留量；如果洗刷吸頭與反應(yīng)孔底部的間隔稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果洗刷吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液功率下降，殘留量增加。
現(xiàn)在的洗板機(jī)一般運(yùn)用兩種類型的洗頭：剛性和起浮的。起浮洗頭中的吸頭可在洗刷進(jìn)程中安閑上下移動(dòng)，而剛性洗頭則固定在恰當(dāng)?shù)姆轿?。運(yùn)用剛性洗頭的洗刷操作在優(yōu)化起來更為凌亂，因?yàn)槟阈枨蠓浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用幾種不同的板，那可能會(huì)很耗時(shí)。在運(yùn)用起浮洗頭時(shí)，吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要，因此洗頭會(huì)下降到底部。

抽吸的方位也對(duì)殘留量有著重要影響；如果每個(gè)孔只運(yùn)用一個(gè)抽吸點(diǎn)（這很常見，因?yàn)楦欤?，那么抽吸的方位需求?yōu)化。的方位取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應(yīng)孔的中心，即便這是全部洗頭zui常見的默許方位。一般來說，方位在孔中心與孔壁之間的某處。
反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。

如果沒有自動(dòng)洗板機(jī)，選用手工洗刷，那么也需求注意幾點(diǎn)。運(yùn)用8道或12道微量移液器，選用倒吸的方法進(jìn)行洗刷；不同廠家的洗液不宜互相混用。洗板時(shí)需保證微孔板平放，將洗刷液注滿各孔，但盡量避免漏液，以每孔300 µl為宜；板洗次數(shù)一般為3次，要保證洗板的浸泡時(shí)間，每次浸泡時(shí)間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，舉薦每次洗板后進(jìn)行決議，并及時(shí)替換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。
ELISA試劑盒看起來很簡單，可是在實(shí)際操作進(jìn)程中，也不能掉以輕心，仍是應(yīng)該仔細(xì)查看洗刷進(jìn)程，才華取得準(zhǔn)確的效果。