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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>公司動(dòng)態(tài)>>影響ELISA測(cè)定成果的標(biāo)本要素
血清是zui常用的ELISA標(biāo)本,血漿一般可視為與血清平等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽(yáng)性和假陰性成果主要是攪擾性物質(zhì)所造成的,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種:
1.內(nèi)源性物質(zhì)有人以為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性攪擾物質(zhì),能夠不同程度影響檢測(cè)成果。常見的攪擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽(yáng)性。
處理該狀況的辦法是:
①用F(ab)2代替完好的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中相同有效);③檢測(cè)抗原時(shí),能夠用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。
(2)補(bǔ)體ELISA體系中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被露出出來(lái),使C1q能夠?qū)⒍哌B接起來(lái),然后構(gòu)成假陽(yáng)性。處理的辦法是:①用EDTA稀釋標(biāo)本;②用53℃,10min或56℃,30min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來(lái),也能構(gòu)成假陽(yáng)性。處理的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig(s),但加入量缺乏或亞類不一起無(wú)效。
(4)嗜靶抗原的本身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合構(gòu)成復(fù)合物,在ELISA辦法中均可攪擾抗原抗體測(cè)定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn),處理的辦法是:測(cè)定前需用理化辦法將其解離后再測(cè)定。
(5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體臨床標(biāo)本展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的印象確診及靶向醫(yī)治等新技術(shù),均有可能使這些患者體內(nèi)發(fā)生抗鼠抗體;別的,被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的患者體內(nèi)也能夠發(fā)生抗鼠Ig(s)抗體。這些患者ELISA測(cè)守時(shí)均可發(fā)生假陽(yáng)性。處理的辦法是:測(cè)定抗原時(shí),在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig(s),然后戰(zhàn)勝因?yàn)樯鲜鲈驑?gòu)成的假陽(yáng)性。
(6)穿插反響物質(zhì)類、類AFP樣物質(zhì)等,是與靶抗原有穿插反響的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定成果影響不大,但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí),假如穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí),也會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性成果。
(7)標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、*、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對(duì)ELISA測(cè)定成果有攪擾效果。
2.外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是因?yàn)橛糜贓LISA測(cè)定的血標(biāo)本的采集、儲(chǔ)存等不妥所造成的。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本儲(chǔ)存過久、標(biāo)本凝集不全和*中添加物等影響。
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