實(shí)驗(yàn)方法原理 根據(jù)葉綠素對(duì)可見光的吸收光譜，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)下測(cè)定其光密度，而后用公式計(jì)算出葉綠素含量，此法度高，且能在未經(jīng)分離的情況下分別測(cè)出葉綠素a、b的含量。
根據(jù)朗伯－比爾定律，某有色溶液的光密度D與其濃度C及液層厚度L成正比，即：
D＝kCL
式中k為比例常數(shù)，當(dāng)溶液濃度以重量百分濃度為單位，液層厚度為 1 厘米時(shí)，k稱為該物質(zhì)的比吸收系數(shù)。
如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此溶液在某一波長(zhǎng)下的總光密度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下光密度的總和，這就是光密度的加和性。
葉綠素a、b在紅光區(qū)的zui大吸收峰分別位于663 nm 和 645 nm，在波長(zhǎng)663 nm 下，葉綠素a、b的80％丙酮溶液的比吸收系數(shù)分別為82.04和9.27，在波長(zhǎng)645nm下分別為16.75和45.6，可據(jù)此列出下列關(guān)系式：
式中的D663和D645為葉綠素溶液在波長(zhǎng)663nm和645nm時(shí)的消光度，Ca和Cb分別為葉綠素a和b的濃度，以毫克/升為單位。
將Ca與Cb相加，即得葉綠素總量CT。
另外，由于葉綠素a、b在652nm處有相同的比吸收系數(shù)（均為34.5），也可在此波長(zhǎng)下測(cè)定一次消光度（D652）而求出葉綠素a、b的總量：
儀器、耗材 新鮮葉片丙酮研缽漏斗天平剪刀燒杯濾紙量筒分光光度計(jì)
實(shí)驗(yàn)步驟
稱取新鮮葉片0.5克，剪碎置研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂，并加入2-3 ml 80％丙酮，研成勻漿，再加入10 ml 80％丙酮，繼續(xù)研磨充分，用一層加丙酮濕潤(rùn)過的濾紙過濾，再用少量丙酮將濾紙和研缽上的色素沖洗干凈，定容至25 ml 容量瓶中，搖勻。
吸取葉綠素丙酮提取液2 ml ，加80%丙酮2 ml 稀釋后，倒入1 cm 比色杯中，用分光光度計(jì)分別在波長(zhǎng)645nm、663nm和652nm下測(cè)定光密度，以80％丙酮為空白對(duì)照。
按公式（3）、（4）、（6）分別計(jì)算葉綠素a、b濃度及總濃度（毫克/升）
按下式計(jì)算葉綠素在葉片中的含量：
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