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技術(shù)文章

*原時間(PT)測定實驗

閱讀:338發(fā)布時間:2015-6-25

實驗方法原理    待測血漿加入過量的含鈣組織凝血活酶,重新鈣化的血漿在組織因子存在時激活因子成為X成為Xa。后者使*原轉(zhuǎn)變?yōu)?,*使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蝗苄岳w維蛋白,測定凝固所需時間、即為待測血漿*時間(PT)、PT測定是外源性系統(tǒng)理想和常用的篩選實驗,也可作為外源性途徑凝血固定做定量試驗,同時也可用于口服抗凝劑治療的監(jiān)控.標本的來源與保存:

靜脈采血,置于含有1/10體積0.109mol/L*抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中,輕輕顛倒混勻.3000rpm(或25O0)離心15分鐘,收集上層液(血漿,黃色),標本在不同條件下保存時間如下:-80℃保存,不宜超過3O天,一20℃保存,不宜超過14天,2一8℃保存,不宜超過6小時,22-24℃保存,不宜超過2小時測定.
試劑、試劑盒    PT試劑
實驗步驟    
1. 試劑重建:

于保存每瓶PT試劑加人2.0ml蒸餾水輕搖溶解.注意:試劑溶解后2-8℃可保存7天,室溫(15-25℃)可保存24小時,勿凍結(jié).

2. 手工測定:

取待測血漿(參比血漿)0.1ml.37℃孵育2分鐘,加入37℃預溫凝血活酶0.2ml;混勻,立即啟動秒表,記錄凝固時間,即為PT值.

3. *測定:

請按儀器提供的參數(shù)操作

正常值:

1. 以時間表示11-15秒

2. 以PTD表示0.95-1.24

3. 以INR表示0.94-1.30
收起 
注意事項    
l. 采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,貯血必須使用塑料試管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管,避免*活化.

2. 采血時*不可束縛過緊并不應超過5分鐘,否則導致凝血及纖溶因子活化.

3. 血液應立即加抗凝劑,血漿制備必須及時,血漿分離應盡快去除血小板血漿分離后應盡快測定。

4. 血漿預溫不宜超過10分鐘.

5. 凝血活酶預溫不宜超過30分鐘。

6. 用濁度法測定終點的自動化凝血儀,溶血和較明顯的黃疸及脂血會影響測定結(jié)果,此時宜用手工法或電子機械或凝血儀測定.

7. 紅細胞比容超過55%或小于20%時,應調(diào)整抗凝劑用量,抗凝劑體積(ml)=0.00185×血液體積(ml)×(100-比容).

8. 不宜使EDTA·Na2. 肝素,草酸鹽抗凝,應使用0.109mol/L拘櫞酸鈉抗凝。

9. 一80℃及一20℃保存樣品,測定時37℃迅速融化,不可反復凍融.

10. 樣品采集避免溶血及組織液污染。

11. 建議各實驗室建立自己的參考值范圍。

12. 手工操作時,*原時間的終點計算以出現(xiàn)混濁的初期凝固為準.

13. 測定溫度36.5-38.5℃過低或過高溫度均使PT延長.


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