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小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀：307發(fā)布時(shí)間：2016-3-24

小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
一、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將小鼠斷頸致死，置 75%酒精泡2-3 秒鐘，取肝臟，置于盛有 PBS 的平皿中。
 
2. 剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有 PBS 液的平皿中。
 
3. 用*將臟器剪成小塊(大小約 1mm2)，玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管，離心(1000 rpm，5 min)。
 
4. 視組織或細(xì)胞量加額加入5-6 倍(3-5  ml)*，37℃中消化 20 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次，或用吸 管吹打一次，使細(xì)胞分離。
 
5. 加入3-5 ml 含血清的培養(yǎng)液以中止*消化作用。
 
6. 用100 目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊。
 
7. 再次離心5 min，棄上清液。
 
8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
 
9. 加入含血清的培養(yǎng)液 l-2 ml (視細(xì)胞量)，血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
 
10. 將細(xì)胞調(diào)整到5×105/ml 左右，轉(zhuǎn)移至6 孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng)。小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟


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