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豐壽(上海)生物科技有限公司

ELISA試劑盒的雙抗體夾心法檢測

時間:2016-1-18閱讀:325
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    在ELISA試劑盒應(yīng)用中有替代前者的趨勢。由于ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種,增加了操作步驟,在臨床檢驗中ABS-ELISA應(yīng)用不多。 其原因可能是兩個順序采用高陽性預(yù)測值,因為這兩種檢測方法的樣品反應(yīng)有較高的概率是真實的。而不是那些只在一個反應(yīng)里。ELISA試劑盒即使WHO準則中提到,如果驗證性測試不可用,可以使用一個備用的測定,這是作為主要的測定,用于確認樣品的狀態(tài)。
    可得出結(jié)論:ELISA試劑盒單一的ELISA試劑盒反應(yīng)的樣品有很高的概率是由負NAT或RIBA顯示。樣本是由兩個不同的ELISA檢測抗-HCV體現(xiàn),ELISA試劑盒其他概率是由NAT或RIBA多次反應(yīng)數(shù)據(jù)的證實。
    獻血者抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng),ELISA試劑盒但負面的NAT和RIBA不一定是*遞延。他們可能會重新接納這些捐助者作出了巨大的貢獻,作為它允許定期寶貴的動機捐助者,其血液中已被證明是安全的。收件人的血液制品從以前的抗-HCV ELISA呈陽性,ELISA試劑盒基因- PCR呈陰性,RIBA不確定的或負的捐助者的捐獻,沒有丙型肝炎病毒感染。過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,此時反應(yīng)后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結(jié)果將低于實際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(yīng)(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。

    鉤狀效應(yīng)嚴重時,反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應(yīng)注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單抗體制備此類可削弱鉤狀效應(yīng)。假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性,這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題。雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結(jié)合。

    用作的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合,表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。采用F(ab')或Fab片段作酶結(jié)合物的,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾。ELISA試劑盒雙抗體夾心法ELISA是否受RF的影響,已被列為這類的一項考核指標。雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。

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