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影響轉(zhuǎn)染的因素很多,主要因素有以下幾個(gè)。
一、細(xì)胞狀態(tài)
在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前,先制定一個(gè)適當(dāng)?shù)姆N板方案,使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持狀態(tài)。一般低的細(xì)胞代數(shù)(<50)能確保基因型不變。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞,細(xì)胞生長旺盛,zui容易轉(zhuǎn)染。
二、DNA質(zhì)量
DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù),如脂質(zhì)體等,基于電荷吸引原理,如果DNA不純,帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。另外,對一些內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞(如原代細(xì)胞,懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞),需要在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子,保證理想的轉(zhuǎn)染效果。
三、轉(zhuǎn)染方法
不同的細(xì)胞適用不同的轉(zhuǎn)染方法,如果實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立了全套方法,摸出了轉(zhuǎn)染條件,就照做。如果是新細(xì)胞系,查看其成功轉(zhuǎn)染案例??蓞⒖嫁D(zhuǎn)染試劑提供的已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)資料,如果你的細(xì)胞適用,可根據(jù)所選轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法照做。許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)及檢測時(shí)間等。ViaFect轉(zhuǎn)染試劑是有創(chuàng)新型混合脂質(zhì)配方的新生代轉(zhuǎn)染試劑,可用于DNA轉(zhuǎn)染,低毒。無需去除血清,導(dǎo)入轉(zhuǎn)染試劑:DNA復(fù)合物后,無需洗滌或更換培養(yǎng)基,是目的基因在細(xì)胞中表達(dá)實(shí)驗(yàn)的推薦選擇。
四、轉(zhuǎn)染試劑
不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),通過這些資料選擇實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。當(dāng)然,的是、低毒、方便、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑。如ViaFect轉(zhuǎn)染試劑適用于多種類型的細(xì)胞系,成功轉(zhuǎn)染多種類型,包括貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞和干細(xì)胞來源的細(xì)胞,它在多種難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率更高。另外 ViaFect轉(zhuǎn)染試劑毒性低,能夠在轉(zhuǎn)染過程中保持細(xì)胞的生物學(xué)和細(xì)胞代謝,從而更準(zhǔn)確的呈現(xiàn)細(xì)胞模型的生物學(xué)狀態(tài)。 而且ViaFect轉(zhuǎn)染試劑簡單易用,并可進(jìn)行反向轉(zhuǎn)染(Reverse Transfection),無需復(fù)雜優(yōu)化。 可以說,同類轉(zhuǎn)染試劑中,ViaFect轉(zhuǎn)染試劑的性價(jià)比更高。
五、載體構(gòu)建
轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建(病毒載體,質(zhì)粒DNA,RNA,PCR產(chǎn)物,寡核苷酸等)也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細(xì)胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響。如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,因此選擇組成或可調(diào)控,強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。
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