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上海一研生物科技有限公司

烈性噬菌體與噬菌體的分離及效價測定

時間:2016-1-20閱讀:1892
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    噬菌體是一種專門寄生在微生物體內(nèi)的病毒,它的頭、尾外部都有由蛋白質(zhì)組成的外殼(頭膜和尾鞘),頭的內(nèi)部含有DNA。噬菌體的生活過程可分為對宿主的吸附、侵入、增殖、成熟和裂解五個階段。噬菌體分為烈性噬菌體(virulent phage)和溫和性噬菌體(tempe-rate phage)。烈性噬菌體侵入微生物細(xì)胞后引起細(xì)胞裂解,溫和性噬菌體感染微生物細(xì)胞后不引起細(xì)胞裂解。發(fā)酵工業(yè)受噬菌體感染,會使生產(chǎn)受到嚴(yán)重影響,特別是烈性噬菌體的感染,其后果是毀滅性的。為了防止噬菌體感染,除了要采取防治措施外,更重要的是要開展抗噬菌體菌株的選育。

(1)烈性噬菌體與噬菌體的分離及效價測定

    烈性噬菌體侵蝕宿主細(xì)胞后能在宿主內(nèi)大量繁殖,釋放出許多子代噬菌體,進(jìn)而感染周要細(xì)胞,使其裂解死亡,這樣就會在固體培養(yǎng)基上形成一個肉眼可見的空斑,即噬菌斑。噬菌體種類不同,其形成的噬菌斑也不一樣。噬菌斑大小O.1~2.Om rn,形態(tài)有暈圈的,也有多重同心圓斑的,還有圓形或近似圓形的等。一般情況下,每種噬菌體所形成的噬菌斑的形態(tài)是相對穩(wěn)定的,但有時也隨著宿主生理狀態(tài)、菌齡和培養(yǎng)條件不同而變化。噬菌斑的這些形態(tài)特征可以作為噬菌體的鑒定指標(biāo).也可利用其對噬菌體進(jìn)行純種分離計數(shù)。每毫升試樣中所含有的噬菌體的數(shù)量稱為效價。

①雙層瓊脂法雙層瓊脂法是檢查和分離噬菌體常用的方法.

②快速測定法將噬菌體和對數(shù)期敏感細(xì)胞懸浮液與含有O.5~0.8%瓊脂培養(yǎng)基混合,加到無菌載玻片上攤平凝固,經(jīng)培養(yǎng)后,在顯微鏡、解剖鏡或放大鏡下觀察噬菌斑并計數(shù)。

(2)溫和性噬菌體和溶源性細(xì)胞 溫和性噬菌體感染微生物細(xì)胞后,細(xì)胞不會被裂解,而且能繼續(xù)生長繁殖,噬菌體DNA整合到寄主染色體上,與寄主染色體一道復(fù)制,并隨著細(xì)胞繁殖傳遞到子代。被溫和性噬菌體寄生的細(xì)菌稱為溶源性細(xì)菌。

    侵入到細(xì)菌的溫和性噬菌體,其DNA整合在細(xì)菌的染色體上,不能成為原有的顆粒形態(tài).這種隱藏狀態(tài)的噬菌體稱為原噬菌體(prophage)。原噬菌體沒有感染力,但當(dāng)它離開溶源性細(xì)菌染色體后,就能在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行自身復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌裂解。

    在溶源性細(xì)菌的分裂過程中,有極少數(shù)溶源性細(xì)胞的原噬菌體脫離細(xì)菌染色體,進(jìn)入營養(yǎng)期進(jìn)行繁殖,引起細(xì)菌裂解,釋放成熟噬菌體。除了自發(fā)裂解外,還可以采用人工誘導(dǎo)的方法,如采用物理、化學(xué)誘變劑處理,誘導(dǎo)溶源性細(xì)胞釋放大量的噬菌體。

    在細(xì)胞繁殖過程中,溶源性細(xì)菌以偶然的機(jī)會也會失去原噬菌體而成為非溶源性細(xì)菌,這個過程稱為復(fù)愈。

    原噬菌體整合在細(xì)菌的染色體上,能賦予溶源性細(xì)菌一些明顯的特征,免疫性就是其中之一。溶源性細(xì)菌對同一類噬菌體具有免疫性,表現(xiàn)為釋放的成熟噬菌體,即使附著在溶源性細(xì)菌的細(xì)胞壁上,或者已經(jīng)侵染,但不能在細(xì)胞內(nèi)繁殖,這種現(xiàn)象稱為免疫性(immu ni—ty)。少數(shù)溶源性細(xì)菌由于在其染色體上整合了溫和性噬菌體的原噬菌體而使自己產(chǎn)生了除免疫性以外的新表型,這種現(xiàn)象稱為溶源轉(zhuǎn)變(lysogenic conversion)。

    溶源現(xiàn)象普遍存在于各種微生物中,在發(fā)酵生產(chǎn)中也不能忽視溫和噬菌體的感染,尤其在選育抗噬菌體菌株時,要區(qū)別真正抗性菌株和溶源性菌株。

    檢驗溶源菌的方法是將少量溶源性細(xì)菌與大量的敏感性指示菌相混合,加入到瓊脂培養(yǎng)基中倒平板。培養(yǎng)后,溶源性細(xì)菌長成菌落。由于溶源性細(xì)菌在分裂過程中有極少數(shù)個體會發(fā)生自發(fā)裂解,其釋放的噬菌體會不斷侵染溶源菌周圍的敏感菌,所以會形成一個個*有溶源性細(xì)菌的小菌落、四周有透明圈的特殊噬菌斑。

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