電鏡組織化學(xué) 技術(shù)是在光鏡組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的形態(tài)學(xué)研究技術(shù)，它將組織化學(xué)與電鏡技術(shù)相結(jié)合，使組織化學(xué)研究從光鏡微細(xì)結(jié)構(gòu)水平發(fā)展到電鏡超微結(jié)構(gòu)水平。電鏡組織化學(xué)技術(shù)將組織細(xì)胞中特定的化學(xué)成分通過特定的化學(xué)反應(yīng)形成反應(yīng)產(chǎn)物，然后使其形成電鏡下易于觀察的高電子密度不溶性沉淀物，從而在超微結(jié)構(gòu)水平對特定化學(xué)成分進行原位分析，由此將生物化學(xué)與超微結(jié)構(gòu)有機起來，顯示組織細(xì)胞內(nèi)各種固有化學(xué)成分的定位。電鏡組織化學(xué)技術(shù)主要檢測一些酶的活性及其在超微結(jié)構(gòu)的定位。雖然目前已知酶的種類超過2200余種，但電鏡組織化學(xué)能顯示的不超過100種。

一、酶組織化學(xué)反應(yīng)過程

欲觀察某些酶類在細(xì)胞內(nèi)的分布，可通過酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)顯示酶的存在部位，即在一定條件下，利用細(xì)胞內(nèi)的酶作用于相應(yīng)底物的特性，使酶與底物在酶所在部位形成中間復(fù)合體，即易溶于水的酶反應(yīng)產(chǎn)物(也稱初級反應(yīng)產(chǎn)物)，此過程系酶作用于底物的酶反應(yīng)過程，為特異性反應(yīng)；當(dāng)捕捉劑，如電子供體等存在時，該中間復(fù)合體迅速轉(zhuǎn)變成不溶的沉淀物(也稱zui終反應(yīng)產(chǎn)物)，此階段為捕捉反應(yīng)，為非特異性的，形成的終產(chǎn)物經(jīng)適當(dāng)處理可在電鏡下進行定性定位分析。

二、酶反應(yīng)底物的特異性

一般認(rèn)為酶作用的底物具有較嚴(yán)格的選擇性。這也是酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)，所以實驗中應(yīng)盡量保證酶反應(yīng)的特異性。常用的方法包括：

1．在孵育液中加入非特異性酶的抑制劑，除去不相關(guān)的酶反應(yīng)。

2．選擇特異性較強的專一底物。

3．選擇酶的zui適pH，如酸性磷酸酶和堿性磷酸酶雖然作用底物相同，但是，兩者的zui適pH不同，所以通過選擇zui適pH可獲得較特異的酶反應(yīng)。

三、捕捉反應(yīng)

電鏡酶組織化學(xué)常用的捕捉反應(yīng)為金屬鹽沉淀法和嗜鋨性物質(zhì)生成法兩種。

1．金屬鹽沉淀法  其原理是使酶反應(yīng)所生成的易溶性初級反應(yīng)產(chǎn)物與重金屬結(jié)合，形成難溶的終產(chǎn)物，即高電子密度的沉淀物。常用的重金屬有鉛、銅、鋇和鈰等。

2．嗜鋨性物質(zhì)生成法  基本原理是使酶反應(yīng)產(chǎn)生嗜鋨性終產(chǎn)物，后者經(jīng)OsO4 固定，形成高電子密度的鋨黑，電鏡下容易識別。

電鏡酶組織化學(xué)結(jié)果的判斷應(yīng)從細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、反應(yīng)產(chǎn)物電子密度的強弱、分布定位是否準(zhǔn)確等方面綜合分析。良好的染色應(yīng)該是酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物的定性、定位明顯而準(zhǔn)確，電子密度均勻、顆粒細(xì)密。如果出現(xiàn)定位不準(zhǔn)確或反應(yīng)產(chǎn)物不同程度的彌散，則為人工假象．需盡力避免。