實(shí)驗(yàn)步驟

1. 收集10ml全血，加入不含防腐劑的肝素（0.2ml肝素/10ml全血）。實(shí)驗(yàn)全過程保持無菌操作。

2. 在15ml離心管中的肝素化血中加入1ml 6%葡萄糖，室溫放置20~30min，沉降紅細(xì)胞。沉降時間不宜過長，否則單核細(xì)胞將不再保留在富含白細(xì)胞的血漿。

3. 從葡聚糖處理的血中小心收集紅細(xì)胞上層的富含白細(xì)胞的血漿。

4. 富含白細(xì)胞的血漿室溫300g離心8min，沉淀細(xì)胞。

5. 棄上清，細(xì)胞輕懸于1ml PBS中。

6. 于室溫下，用無菌巴斯德吸管小心將細(xì)胞懸液加在5ml Ficoll-Hypaque之上。此步操作要技術(shù)熟練，才能保持血漿曾在Ficoll-Hypaque層之間界面清晰。

7. 400g低溫（4℃）離心30min，沉淀細(xì)胞。離心后切記不要破壞管中的分層。

8. 淋巴細(xì)胞在血漿和Ficoll-Hypaque層之間的白色渾濁條帶中，小心取出貯存，棄紅細(xì)胞沉淀。

9. 5ml PBS洗一次細(xì)胞，室溫250g離心5min，沉淀細(xì)胞懸于3~5ml生長培養(yǎng)基中。

10. 全部細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25組織培養(yǎng)瓶，加促細(xì)胞分裂劑。