神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的，除了神經(jīng)元以外的所有細(xì)胞。具有支持、滋養(yǎng)神經(jīng)元的作用，也有吸收和調(diào)節(jié)某些活性物質(zhì)的功能。可分為少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyyte)、星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)、施萬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞四種。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞有分裂的能力，故可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

少突膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)

    少突膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成細(xì)胞，它起源于胚胎神經(jīng)管的神經(jīng)上皮細(xì)胞，隨著中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，逐步遷移到白質(zhì)，并增殖、分化，形成髓鞘包裹軸突。

1．材料

(1)材料來源：新生1周內(nèi)SD大鼠的腦組織。

(2)手術(shù)器械：解剖剪、解剖鑷、眼科剪和*。

(3)培養(yǎng)皿和蓋玻片：用O．01％PLL包被蓋玻片，置溫箱中烘干，使用前放入培養(yǎng)皿中。

(4)分離液：將9ml Percoll原液和lml10×HBSS混合后，用lOml HBSS稀釋。

(5)消化液：1％*。

(6)培養(yǎng)液：DMEM／F12混合培養(yǎng)液，添加15％FBS、6g／L葡萄糖、10萬I U／L*和100mg／L*。

2．方法

(1)取材：通過頸動(dòng)脈放血處死大鼠，無菌條件下取大腦，置人PBS液中，在解剖顯微鏡下剔除腦膜及血管，分離出大腦皮層。

(2)消化：將大腦皮層剪碎，加入1％*，37℃水浴中振蕩消化30min。加入2ml FBS終止消化，離心(1000r／min，10min)。

(3)細(xì)胞懸液制備：吸去上清液，用HBSS洗滌細(xì)胞2次，再用：100目濾器過濾。在濾液中加入HBSS，至20ml，制成細(xì)胞懸液。

(4)收集細(xì)胞：在50ml離心管中加入分離液，將10ml細(xì)胞懸液鋪在分離液的上面。在4℃條件下，離心(14000r／min，45min)。離心管中的液柱自上而下呈現(xiàn)三層，即髓鞘層、少突膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞層、紅細(xì)胞層。收集靠近髓鞘層的少突膠質(zhì)細(xì)胞。用2倍體積的HBSS稀釋，離心(2000r／min，10min)。

(5)培養(yǎng)細(xì)胞：吸去上清液．用HBSS混懸細(xì)胞，離心(1000r／min，10min)。用培養(yǎng)液混懸沉淀細(xì)胞，使細(xì)胞充分分離，然后以1×106的密度接種于預(yù)先涂有多聚賴氨酸的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中，3d換液一次。

3．結(jié)果觀察培養(yǎng)的細(xì)胞中95％以上為少突膠質(zhì)細(xì)胞。培養(yǎng)24h后，大部分少突膠質(zhì)細(xì)胞已貼壁生長。少突膠質(zhì)細(xì)胞的胞體較小，呈圓形或三角形。胞質(zhì)少，核較大而圓，核仁不明顯。大多數(shù)細(xì)胞具有典型的雙極或三極突起，細(xì)胞突起短，分支較少。若在培養(yǎng)液中使用有絲分裂抑制劑，少突膠質(zhì)細(xì)胞在體外培養(yǎng)可達(dá)2個(gè)月?？捎冒肴樘悄X苷脂免疫細(xì)胞化學(xué)染色及髓鞘堿性蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色等方法鑒定少突膠質(zhì)細(xì)胞。

4．注意事項(xiàng)少突膠質(zhì)細(xì)胞膜上半乳糖腦苷脂的出現(xiàn)與少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的狀態(tài)有關(guān)，如果培養(yǎng)物取材于出生前的胚胎神經(jīng)細(xì)胞，則只有在體外培養(yǎng)7～lOd后才能表達(dá)半乳糖腦苷脂。