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山羊VEGF-E酶聯(lián)免疫說明書操作步驟

時間:2015-12-16閱讀:273
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山羊VEGF-E酶聯(lián)免疫說明書實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中山羊VEGF-E水平。用純化的山羊VEGF-E抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入VEGF-E,再與HRP標記的VEGF-E抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的VEGF-E呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中山羊VEGF-E濃度。 

山羊VEGF-E酶聯(lián)免疫說明書操作步驟

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 抗體

溫育:操作同3。

洗滌:操作同5。

顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。抗體

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