細胞增殖過程中必伴有DNA復制，3 H標記的胸腺嘧啶脫氧核苷(TdR)摻人到新合成的DNA中，隨細胞增殖，帶有標記的DNA均勻分布到子代細胞中。此時，測定培養(yǎng)細胞中3 H的放射性強度，即可反映細胞的代謝和增殖情況。

(一)材料

1．待測(受試后)細胞懸液，濃度調(diào)至5×105／ml。

2．10％～15％FBS RPMI 1640培養(yǎng)液。

3．3 H—TdR溶液．用細胞培養(yǎng)液配制，濃度為1μCi3H-TdR／μl。

4．閃爍液。

5．24孔(或96孔)培養(yǎng)板。

6．閃爍計數(shù)器。

(二)方法

1．在培養(yǎng)板各孔中加入O．1ml或O．2ml細胞懸液，37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～2．5d。

2．每孔加入含有1μCi3H-TdR新鮮細胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4～18h。棄去培養(yǎng)液，PBS洗滌2～3次，清除未摻人同位素。

3．將細胞消化后，用細胞樣品收集器將各孔中細胞分別收集于玻璃纖維濾紙上，56℃烘烤2h，使其干燥。

4．將收集各孔細胞濾紙分別放人一個閃爍測定瓶中，加入3～5ml閃爍液，用閃爍計數(shù)器測定每分鐘脈沖數(shù)(counts per minute，CPM)，記錄每孔(約5×104個)細胞的CPM值。

(三)結(jié)果分析

    被標記的細胞是處于分裂期s期的細胞。[3 H]一TdR摻人量反映DNA合成的快慢。

(四)注意事項

3 H同位素具有放射損傷作用，實驗應在的放射性實驗室內(nèi)，按照相關的放射性實驗操作規(guī)程進行。