從原始孔中得到的陽性雜交瘤細(xì)胞，可能來源于二個或多個雜交瘤細(xì)胞，因此它們所分泌的抗體是不同質(zhì)的。為了得到*同質(zhì)的單克隆抗體，必須對雜交瘤細(xì)胞進 行克隆化。另一方面，雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)的初期是不穩(wěn)定的，有的細(xì)胞丟失部分染色體，可能喪失產(chǎn)生抗體的能力。為了除去這部分已不再分泌抗體的細(xì)胞，得到分泌 抗體穩(wěn)定的單克隆雜交瘤細(xì)胞系（又稱亞克?。?，也需要克隆化。另外，*液氮凍存的雜交瘤細(xì)胞，復(fù)蘇后其分泌抗體的功能仍有可能丟失，因此也應(yīng)作克隆化， 以檢測抗體分泌情況。

    通常在得到針對預(yù)定抗原的雜交瘤以后需連續(xù)進行2-3次克隆化，有時還需進行多次。所謂克隆化是指使單個細(xì)胞無性繁殖而獲得該細(xì)胞團 體的整個培養(yǎng)過程?？寺』姆椒ê芏?，如有限稀釋法、軟瓊脂法、單細(xì)胞顯微操作法、單克隆細(xì)胞集團顯微操作法和熒光激活細(xì)胞分類儀（FACS）分離法。

雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

    （1）雜交瘤細(xì)胞的凍存。在建立雜交瘤細(xì)胞的過程中，有時一次融合產(chǎn)生很多“陽性”孔，來不及對所有的雜交瘤細(xì)胞作進一步的工作，需要把其中一部分細(xì)胞凍存起來；另一方面，為了防 止實驗室可能發(fā)生的意外事故，如停電、污染、培養(yǎng)箱的溫度或CO2控制器失靈等給正在建立中的雜交瘤帶來災(zāi)難，通常盡可能早地凍存一部分細(xì)胞作為種子，以 免遭到不測。在雜交瘤細(xì)胞建立以后，更需要凍存一大批，以備今后隨時取用。
    （2）雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇。雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞或其他細(xì)胞在液氮中保存，若無意外情況時，可保存數(shù)年至數(shù)十年。復(fù)蘇時融解細(xì)胞速度要快，使之迅速通過zui易受損的-5℃—0℃，以防細(xì)胞內(nèi)形成冰晶引起細(xì)胞死亡。

單抗特性的鑒定

⑴ 單克隆性的確定 包括雜交瘤細(xì)胞的染色體分析、單抗免疫球蛋白重鏈和輕鏈類型的鑒定和單抗純度鑒定等。
⑵ 單抗理化特性的鑒定。從實用意義上說，單抗對溫度和PH變化的敏感性以及單抗的親合力都是理化特性鑒定的主要項目，它們可為單抗的使用和保存提供重要依據(jù)。
⑶ 單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性測定。單抗與相應(yīng)抗原的反應(yīng)性決定于它所識別的抗原表位，確定單抗針對的表位在抗原結(jié)構(gòu)上的位置，是單抗特性鑒定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，同時，進一步分析這類表位的差別， 可正確評價單抗的特異性和交叉反應(yīng)性。[2] 

特點

編輯
    一是特異性，針對特定的單一抗原表位，它具有高度的特異性，抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現(xiàn)為特異性結(jié)合、選擇性殺傷靶細(xì)胞、體內(nèi)靶向性分布以及具有更強的療效。
二是多樣性，主要表現(xiàn)在靶抗原的多樣性、抗體結(jié)構(gòu)的多樣性、作用機制的多樣性等方面。
三是定向性，抗體藥物可以定向制造，就是根據(jù)需要制備具有不同治療作用的抗體藥物?；谶@些特點，我們可以用來制成“生物”運送藥物至病害部位，主要是癌細(xì)胞，從而達到治療效果。[1] 

鼠源性單克隆抗體

    雜交瘤單克隆抗體制備技術(shù)的基本原理是利用聚乙二醇作為細(xì)胞融合劑，使免疫的小鼠脾細(xì)胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞在體外進行融合，在HAT選擇性培養(yǎng)基的作用下，只讓融合成功的雜交瘤細(xì)胞生長，經(jīng)過反復(fù)的免疫學(xué)檢測篩選和單個細(xì)胞培養(yǎng)(克隆化)，zui終獲得既能產(chǎn)生所需單克隆抗體，又能不斷繁殖的雜交瘤細(xì)胞系，將這種細(xì)胞擴大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，在其產(chǎn)生的腹水中即可得到價的單克隆抗體。由于單抗的應(yīng)用是從體外診斷向體內(nèi)腫瘤定位和治療方向發(fā)展，故鼠源性單抗出現(xiàn)了難以克服的缺點，特別是在體內(nèi)應(yīng)用時，存在主要組織相容性抗原(MHC)和超敏反應(yīng)問題。隨著鼠源單克隆抗體在臨床治療中越來越廣泛的應(yīng)用，降低抗體免疫原性的要求也變得越來越迫切。為了克服這一問題科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。

人鼠嵌合抗體

    為了克服鼠源性單克隆抗體存在的問題，科學(xué)家利用基因工程方法使小鼠的抗體人源化。通過構(gòu)建人一鼠嵌合抗體，在一定程度上減弱了人抗鼠抗體。1984年Morrison等人成功地構(gòu)建了*個人鼠單克隆抗體即嵌合抗體。嵌合抗體指的是鼠單克隆抗體的可變區(qū)基因被人抗體的恒定區(qū)基因通過基因重組技術(shù)所替換而編碼并在合適的宿主細(xì)胞中表達而產(chǎn)生的單克隆抗體。
基本原理:抗體分了的特異性識別、抗原結(jié)合由輕鏈和重鏈可變區(qū)決定的，而異源蛋白產(chǎn)生的人抗鼠抗體反應(yīng)的主要是抗體恒定區(qū)。細(xì)胞

    將小鼠單抗恒定區(qū)用人源化恒定區(qū)代替而拼接成嵌合抗體，使其重鏈和輕鏈的可變區(qū)來白小鼠，恒定區(qū)來自人源性。簡言之嵌合抗體既具有抗原結(jié)合特異性，又大大地降低了鼠單抗的異源性。嵌合抗體是基因工程抗體zui早研究出來的一種抗體，在*和診斷方法已被廣泛的應(yīng)用。雖然嵌合抗體在一定程度上減弱了人抗鼠抗體反應(yīng)，但仍存在一少部分鼠源成分。這直接導(dǎo)致抗體被迅速清除，從而降低治療效果。[3]