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所在地區(qū):江蘇鹽城市

聯(lián)系人:白振萍 (經(jīng)理)

技術(shù)文章

注意幾點即可防止胎牛血清培養(yǎng)中黑點的生成

閱讀:186發(fā)布時間:2016-3-14

    zui近有客戶咨詢胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點如何防止生成?對此我司經(jīng)過詳細(xì)分解,得出以下結(jié)論,為防止客戶由于操作方面而使黑點生成的辦法。對此一定要做好以下幾點。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。 
(2) 培養(yǎng)基無需 37℃水浴。 
(3) 培養(yǎng)基保持zui* PH 值 7.0- 7.2。 
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。 
(5) 掌握細(xì)胞傳代的zui*時機(jī),細(xì)胞切勿生長過老。
1、 化凍 將血清從-20 度冰箱中取出,室溫(或浸于自來水中)化凍(約需要 30 分鐘至 2 小時,也可放于 4 度冰箱化凍過夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入 4 度冰箱中暫時保存) 
2、滅活 
(1)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱(同時放入一個空的血清瓶,內(nèi)裝 100ml 自來水,插入一根溫度 計,溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn)) 
(2)當(dāng)溫度計顯示 56 度時,停止加熱,改為間斷加熱,維持 56 度(±0.5 度)30 分鐘(±3 分鐘; 若不小心使溫度上升超過 56 度,則:若仍未超過 60 度,且時間很短,比如不超過 5 分鐘,則仍可使 用;若超過 60 度,或者時間較長,則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng)) 
(3)取出,自然冷卻至室溫(約需 1-3 小時) ,可分裝或-20 度繼續(xù)凍存。
 3、分裝 
(1)轉(zhuǎn)入無菌間,在超凈臺內(nèi)將血清分裝入 10ml 離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動數(shù)周、混勻; 用吸液管或吹大管吹出血清時要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡, 則在酒精燈火焰上過一下) ) 
(2)放入-20 度冰箱凍存 
(3)全部操作約需要 4-6 小時
    江蘇菲亞生物長期供應(yīng)的胎牛血清來源于澳洲血源和北美血源,我司代理的胎牛血清品牌有NQBB、Gibco、invitrogen、BD等,血清主要產(chǎn)自于澳大利亞,血源以封閉的心臟穿刺方式采自8月齡胎牛,產(chǎn)品經(jīng)3次100nm過濾,在凈化車間過濾包裝。經(jīng)嚴(yán)格檢測確保無支原體,細(xì)菌病毒檢測依據(jù)美國藥典(USP)和美國聯(lián)邦法規(guī)第九篇(9CFR),符合檢測標(biāo)準(zhǔn)。


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