GST-瓊脂糖凝膠4B預(yù)裝柱使用說明

相關(guān)介紹：

GST-瓊脂糖凝膠4B是一種將谷胱-甘肽鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)，主要用于谷胱-甘肽轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記蛋白（GST融合蛋白）、谷胱-甘肽轉(zhuǎn)移酶和谷胱-甘肽依賴蛋白的分離純化，通過一步親和層析，就能獲得高純度的蛋白。與GST-瓊脂糖凝膠FF相比，GST-瓊脂糖凝膠4B能獲得更高的載量。

品  名：GST-瓊脂糖凝膠4B

英文名：Glutathione NUPharose 4B

規(guī)  格：20 ml，100 ml

運(yùn)  輸：2 ~ 30℃，常壓、避光

貯  存：20%乙醇，2~8℃

使用方法：

1. 裝柱

1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用蒸餾水配成勻漿并脫氣。

1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。

1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過5柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過5柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

注意：（1）所有操作過程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。（3）如無條件做1.2，填料層有氣泡，可進(jìn)行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。（4）乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

2. 平衡

將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。推薦的結(jié)合平衡緩沖液為：10mM PBS (140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4)。

3. 上樣

切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：置換緩沖液，澄清過濾（0.45、0.22μm）等。

4. 沖洗

用2-3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未交換的組分被清洗出去。

5. 洗脫

一般推薦用10mM還原型谷胱-甘肽溶液（可含緩沖成分）進(jìn)行洗脫。推薦的洗脫緩沖液為：50mM Tris-HCl, 10 mM 還原型谷胱-甘肽(GSH), pH 8.0。

6. 再生

用蒸餾水按操作流速?zèng)_洗3-5個(gè)柱體積，接著用平衡液洗到平衡3-5個(gè)柱體積。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7. 在位清洗(CIP)

去除沉淀和變性蛋白：用2CV 6M鹽酸胍清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。

去除強(qiáng)疏水蛋白：用3-4CV 70%乙醇清洗，立即用10mM PBS(pH7.4)洗5CV。