小鼠胱抑素C elisa試劑盒原來是這樣操作的！

小鼠胱抑素C(Cystatin C)elisa試劑盒基本信息

1983年Anastasi等在雞蛋清中分離純化得到高純度的半胱胺酸蛋白酶抑制劑（cysteine proteinase inhibitor，CPI）后被命名為胱抑素C.是一種半胱胺酸蛋白酶抑制劑,也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中,是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，分子量為13.3KD,由122個氨基酸殘基組成,可由機體所有有核細胞產(chǎn)生，產(chǎn)生率恒定。循環(huán)中的胱抑素 c僅經(jīng)腎小球濾過而被清除，是一種反映腎小球濾過率變化的內(nèi)源性標志物,并在近曲小管重吸收，但重吸收后被*代謝分解，不返回血液，因此，其血中濃度由腎小球濾過決定，而不依賴任何外來因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球濾過率變化的理想同源性標志物。

小鼠胱抑素C(Cystatin C)elisa試劑盒操作方法

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務，客戶準備好樣本，上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務。其他地區(qū)的客戶，樣本用泡沫箱子包好，放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)， 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。

小鼠胱抑素C elisa試劑盒原來是這樣操作的！