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RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)總結(jié)
基本情況: 小鼠來源白血病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞,屬于巨噬細(xì)胞,貼壁生長。
形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主,一般1~2個核,極少數(shù)有3個核,胞漿伸展時胞體較大。鏡下細(xì)胞為小珍珠似的圓形橢圓形。
2,培養(yǎng)情況
培養(yǎng)條件:10%FBS高糖DMEN,進(jìn)口gibco血清更好
傳代:細(xì)胞增殖較快,70%即可傳代,細(xì)胞有觸角也提示需要傳代,1:3----1:6傳代,推薦使用皿。傳代時切記不要使用*,正常情況下此細(xì)胞貼壁不牢,直接吹打即可,*消化會使細(xì)胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養(yǎng)基吹打,也可以用PBS,感覺無差異。
凍存和復(fù)蘇:和普通細(xì)胞無異。
RAW264.7作為巨噬細(xì)胞有很強(qiáng)的吞噬能力,吞噬抗原后伸出長角,就是大家常見的偽足。同時貼壁黏附能力增強(qiáng),傳代時難以消化下來。
該細(xì)胞貼壁時間短,成片生長,似小菌落般小片生
長,zui后連,成一片并會疊層。傳代密度不易過高或者過低,過低會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢甚至不生長,過高,細(xì)胞會長出偽足。
3, 關(guān)于RAW264.7分化,
正常細(xì)胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細(xì)胞,分化后伸出偽足,貼壁能力增強(qiáng)。
避免方法,
1, 血清是進(jìn)口的真血清
2, 密度不要太高或者太低,由其是需要傳代時切不可拖延時間
3, 傳代時切不可*消化,直接吹打就能下來
4, 不要污染,包括其他細(xì)胞株的污染
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