人封閉蛋白5(CLDN5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人CLDN5抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人CLDN5與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人CLDN5抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薈LDN5抗體與結(jié)合在包被抗體上的人CLDN5結(jié)合、*與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，人CLDN5濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人CLDN5的濃度。

人封閉蛋白5(CLDN5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)
晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超
過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。 
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，
靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為10ng/mL）。
然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。建議配制成以下濃
度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白
孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&
樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。  
 
4. *化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計），實(shí)際配制時應(yīng)多配
制100-200μL。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當(dāng)日使用。 
5. 酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計），實(shí)際配制時應(yīng)多配制
100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。
當(dāng)日使用。 
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例：（以500μL/管為例，也可根據(jù)實(shí)際用量來稀釋，如200μL/管）

人封閉蛋白5(CLDN5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作概要  

1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各 100μL， 37℃孵育 90 分鐘

2. 倒去孔內(nèi)液體，加入 100μL *化抗體工作液，37℃孵育 60 分鐘

3. 洗滌 3 次

4. 加入 100μL 酶結(jié)合物工作液， 37℃孵育 30 分鐘

5. 洗滌 5 次

6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分鐘左右

7. 加入 50μL 終止液，立即在 450nm 波長處測量 OD 值

8. 結(jié)果計算

人封閉蛋白5(CLDN5)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒特別說明：

*: [96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整）

#: 一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.

相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出！

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