ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，RANKL Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，RANKL Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

RANKL Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn)：

1. 標(biāo)本的采取和保存。
2. 試劑的準(zhǔn)備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標(biāo)比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。RANKL Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，RANKL Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，RANKL Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

RANKL Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyA163Hu    人組織多肽抗原(TPA)檢測試劑盒    ELISA Kit for Tissue Polypeptide Antigen (TPA)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA165Hu    人*原A(PGA)檢測試劑盒    ELISA Kit for Pepsinogen A (PGA)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA166Hu    人*原C(PGC)檢測試劑盒    ELISA Kit for Pepsinogen C (PGC)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA167Hu    人前列腺素E合酶(PTGES)檢測試劑盒    ELISA Kit for Prostaglandin E Synthase, Microsomal (PTGES)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA168Hu    人前列腺酸性磷酸酶(ACP3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Acid Phosphatase 3, Prostatic (ACP3)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA174Hu    人髓鞘型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP8)檢測試劑盒    ELISA Kit for Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin (FABP8)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA180Hu    人Ⅳ型膠原(COL4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Collagen Type IV (COL4)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA213Hu    人髓細(xì)胞觸發(fā)受體1(TREM1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Triggering ReHZptor Expressed On Myeloid HZlls 1 (TREM1)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA228Hu    人抗繆勒管激素(AMH)檢測試劑盒    ELISA Kit for Anti-Mullerian Hormone (AMH)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA234Hu    *G4(IgG4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Immunoglobulin G4 (IgG4)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA252Hu    人載脂蛋白C1(APOC1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Apolipoprotein C1 (APOC1)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA253Hu    人麥芽糖酶糖化酶(MGA)檢測試劑盒    ELISA Kit for Maltase Glucoamylase, Intestinal (MGA)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA259Hu    人膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)檢測試劑盒    ELISA Kit for Annexin A5 (ANXA5)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA260Hu    人β2-微球蛋白(β2M)檢測試劑盒    ELISA Kit for Beta-2-Microglobulin (b2M)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA262Hu    人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Transferrin ReHZptor 2 (TFR2)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA275Hu    人抗SSB/La抗體(Anti-La)檢測試劑盒    ELISA Kit for Anti-SSB/La Antibody (Anti-La)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA277Hu    人間隙連接蛋白43(CX43)檢測試劑盒    ELISA Kit for Connexin 43 (CX43)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA278Hu    人踝蛋白(TLN)檢測試劑盒    ELISA Kit for Talin (TLN)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA281Hu    人B-細(xì)胞激活因子受體(BAFFR)檢測試劑盒    ELISA Kit for B-HZll Activation Factor ReHZptor (BAFFR)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA282Hu    人組蛋白H2A(H2A)檢測試劑盒    ELISA Kit for Histone H2A (H2A)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA288Hu    人抗雙鏈DNA抗體(Anti-dsDNA)檢測試劑盒    ELISA Kit for Anti-Double Stranded DNA Antibody (Anti-dsDNA)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA306Hu    人組織蛋白酶L(CTSL)檢測試劑盒    ELISA Kit for Cathepsin L (CTSL)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA310Hu    人載脂蛋白H(APOH)檢測試劑盒    ELISA Kit for Apolipoprotein H (APOH)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml