耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

LX-2, 人肝星形細胞株

3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

C2C12, 小鼠肌原細胞

 細胞名稱

MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

MDA-MB-231（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞

Raji，人Burkitt's淋巴瘤細胞

Saos-2，人成骨肉瘤細胞

Caco-2，人結直腸腺癌細胞

NCI-N87 [N87]人胃癌細胞

MGC80-3（MGC-803）人胃癌細胞

EC109，人食管癌細胞

HGC-27人胃癌細胞

AGS人胃腺癌細胞

U251人膠質(zhì)瘤細胞

THP-1人單核白血病細胞

HuH-7人肝癌細胞

SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

A549, 人肺癌細胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌耐藥細胞株

A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞

WM35, 人黑色素瘤細胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤細胞

WM451, 人黑色素瘤細胞

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞

UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌

Hela, 人宮頸癌細胞系

HNE2, 人鼻咽癌細胞系

SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系

786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞

HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞