輪狀病毒Elisa試劑盒試驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。可是，即使是平淡無(wú)奇的洗刷和關(guān)閉，假如做得不太好，也有或許毀了全部試驗(yàn)。在Elisa試劑盒試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，咱們是否能取得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會(huì)影響您對(duì)成果的判別。怎么下降ELISA的布景，下面有一些tips。
洗刷很主要
洗刷過(guò)程看似很無(wú)聊，本來(lái)很主要，由于假如未的資料（如非特異的抗體或檢查試劑）殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加布景噪音。如有必要，可增加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異反響。假如布景過(guò)高，而您置疑洗刷不行時(shí)，能夠測(cè)驗(yàn)增加洗刷次數(shù)。
抗體濃度須優(yōu)化
咱們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作過(guò)程，可是假如試劑稍有不一樣，則或許需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體會(huì)增加布景。為了避免這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
ELISA試劑盒假如您一向被布景疑問(wèn)所困惑，那么或許您該花些時(shí)刻來(lái)優(yōu)化關(guān)閉液。這或許需求時(shí)刻，但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運(yùn)用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)下降非特異性，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢查試劑發(fā)作相互作用。
zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關(guān)閉液便宜、穩(wěn)定，在去掉洗刷過(guò)程中的一些非特異上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用，由于很簡(jiǎn)單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要增加關(guān)閉液。請(qǐng)勿運(yùn)用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會(huì)下降特異，發(fā)作假陰性。另一個(gè)選擇是運(yùn)用蛋白和非離子型去污劑這兩種關(guān)閉液，后者可幫忙洗刷過(guò)程中的關(guān)閉。
蛋白關(guān)閉液則有所不一樣，是持久的。它們與敞開(kāi)位點(diǎn)并關(guān)閉，一起穩(wěn)定與微孔板的抗原分子。常用的蛋白關(guān)閉液包含牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。血清組分的內(nèi)涵多樣性可使它有用攔截很多不一樣類(lèi)型的分子相互作用。不過(guò)，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)疑問(wèn)的一種方法是運(yùn)用雞或魚(yú)的正常血清。
另一點(diǎn)也很清楚明了：切勿運(yùn)用過(guò)多的檢查輪狀病毒Elisa試劑盒。假如濃度過(guò)高，或許未準(zhǔn)確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)致使高布景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)參加停止液。
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