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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒法檢測研討

時間:2018/1/25閱讀:1202
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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒基因現(xiàn)已整合到銀耳基因組中;RT-PCR成果顯現(xiàn),在銀耳細(xì)胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA;Southern雜交成果表明人胰島素基因以單復(fù)制的方式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗(yàn)經(jīng)過設(shè)置農(nóng)桿菌與銀耳芽孢不同共培育時刻、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nóng)桿菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉(zhuǎn)化功率影響,成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL、農(nóng)桿菌OD=0.5及共培育時刻為2d時,轉(zhuǎn)化功率zui高,為310個轉(zhuǎn)化子/108個銀耳芽孢。轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接5代后對潮霉素仍有抗性,說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳。在試驗(yàn)室已開始樹立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因辦法的基礎(chǔ)上。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株,經(jīng)過凍融法將帶著有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)基因?yàn)檫z傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因(BAC)為意圖基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并進(jìn)一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。試驗(yàn)結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率;GV3101轉(zhuǎn)化率較低,且假陽性較高;LBA4404無抗性菌落長出。此成果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性,且對受體侵染具有一定的特異性。本試驗(yàn)以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒對農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進(jìn)行研究?;谵r(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受許多要素的影響,本試驗(yàn)從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培育時刻、銀耳芽孢濃度、農(nóng)桿菌濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮(AS)的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進(jìn)行優(yōu)化。ELISA試劑盒其轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化成果為:AGL-1菌液OD值為0.4~0.5,AS誘導(dǎo)培育濃度為250μg/mL、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL,共培育72h轉(zhuǎn)化率zui高,可達(dá)500個/10~8,且陽性菌落為89%;EHA105菌液OD值為0.4~0.5。
 LIX1IgG    小鼠血管緊張素原(aGT)
 Lpin1 IgG    小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ) 
 Lpin1 IgG    小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)
 L-型電壓依賴型鈣通道αIgG    小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)
 L-型電壓依賴型鈣通道βIgG    小鼠血管活性腸肽(VIP)
 L型鈣通道蛋白a1亞型3體IgG    小鼠溴脫氧核苷(BrdU) 
 L型鈣通道蛋白a1亞型6IgG    小鼠雄烯二酮(ASD)
 L型鈣通道蛋白IgG    小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)
 L選擇素IgG    小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)
 L-脫羧酶IgG    小鼠心鈉肽(ANP)
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