實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人腎癌組織源分離自癌組織；癌（cancer）是指起源于上皮組織的惡性腫瘤，是惡性腫瘤中常見的一類。相對應的，起源于間葉組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱為肉瘤。有少數(shù)惡性腫瘤不按上述原則命名，如腎母細胞瘤、惡性畸胎瘤等。一般人們所說的“癌癥"習慣上泛指所有惡性腫瘤。癌癥具有細胞分化和增殖異常、生長失去控制、浸潤性和轉(zhuǎn)移性等生物學特征，其發(fā)生是一個多因子、多步驟的復雜過程，分為致癌、促癌、演進三個過程，與吸煙、感染、職業(yè)暴露、環(huán)境污染、不合理膳食、遺傳因素密切相關(guān)。癌細胞，是一種變異的細胞，是產(chǎn)生癌癥的病源。癌細胞與正常細胞不同，有無限增殖、可轉(zhuǎn)化和易轉(zhuǎn)移三大特點，能夠無限增殖并破壞正常的細胞組織。癌細胞除了分裂失控外（能進行多極分裂），還會局部侵入周圍正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部分。分惡性和良性兩種。

方法簡介：

公司實驗室分離的癌組織源采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人腎癌組織源經(jīng)檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠Kruppel樣因子2(KLF2)檢測試劑盒 ，英文名： KLF2 ELISA Kit

Human vionectin / vionectin (VN/CD51+CD61) ELISA Kit 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)檢測試劑盒

Horsemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELAELISAKit 馬主要組織相容性復合體(MHC/ELA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCAM(Humancalmodulin)ELISAKit人鈣調(diào)素

細菌β-半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒40次

Ratacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit大鼠乙酰受體抗體(AChRab)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

TNF重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

信號素3A(SEMA3A)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3A (SEMA3A)

LY6D重組人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

信號素3A(SEMA3A)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3A (SEMA3A)

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白

TNF重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

LY6D重組人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 標簽) Protein

豚鼠堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)檢測試劑盒 ，英文名： FGF2 ELISA Kit

Human calmodulin binding protein (CALD) ELISA Kit 人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)檢測試劑盒

rabbitImmunoglobulinM,IgMELISAKit 兔子免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBacillusthuringiensis,BTELISAKit蘇云金芽孢桿菌蛋白

線蟲凍存試劑盒50次

RabbitcardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腎癌組織源細胞人組織因子途徑抑制因子(TFPI)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human TFPI (Tissue Factor Pathway Inhibitor) ELISA Kit

人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human TM (Thrombomodulin) ELISA Kit

人補體因子4(C4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human C4 (Compleme Compone 4) ELISA Kit

人鐵蛋白(FE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human FE (Ferritin) ELISA Kit