實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

人輸尿管平滑肌分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對細(xì)長的管道，呈扁圓柱狀，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處(輸尿管起始處)；一個(gè)在越過小骨盆入口處；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu)，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段，也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動脈處；盆段，自髂動脈到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開口。輸尿管管壁分為4層，黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成；外膜為疏松結(jié)締組織，營養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。輸尿管有較厚的平滑肌層，可作節(jié)律性的蠕動，使尿液不斷的流入膀胱。因此對輸尿管平滑肌運(yùn)動的研究，是尿動力學(xué)的重要研究方向。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管平滑肌采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：長梭形

傳代特性：可傳3-5代左右，3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人輸尿管平滑肌體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠廋素   英文名稱：   Leptin   規(guī)格：      英文縮寫：   Leptin

小鼠廋素受體   英文名稱：   Leptin receptor   規(guī)格：      英文縮寫：   Leptin R

小鼠促黃體生成激素   英文名稱：   leinizing hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   LH

小鼠   英文名稱：   Lysozyme   規(guī)格：      英文縮寫：   Lysozyme

小鼠羧甲基賴酸(CML)試劑盒 96T/48T

Human ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 人卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)試劑盒

HumanIerleukin1βconveingenzyme,ICEELISAKit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶(ICE)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

DeerInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3試劑盒胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit小鼠內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

CD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原 0.5mgCD117/c-kit/SCFR 干細(xì)胞生長因子受體/細(xì)胞表面分化抗原(抗原)

CIB2 Protein Human 重組人 CIB2 / KIP-2 蛋白

IL11RA重組小鼠 IL11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

LAYN Protein Rat 重組大鼠 Layilin / LAYN 蛋白

FTL重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白 Protein

人輸尿管平滑肌細(xì)胞大鼠生長停滯特異性蛋白6(GAS6)試劑盒 ，英文名： GAS6 ELISA Kit

Mouse vitamin D3 (VD3) ELISA Kit 小鼠3(VD3)試劑盒

RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHD(MouseHistoneDeacetylase)ELISAKit小鼠組織蛋白去乙酰化酶

細(xì)胞TUNEL顯色法(DAB)測定試劑盒10/20次

ELISAKitLCA扁豆凝集素