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人博卡病毒PCR檢測試劑盒準備試劑與收集血樣

時間：2024/1/22閱讀：375

雙重核酸試劑盒（熒光PCR法）　1. 收集標本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20 ℃或 -70 ℃ ）保存，避免反復凍融。

2. 標準品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液。設(shè)標準管 8 管，管加標本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出 500ul 棄去。第八管為空白對照。

3. 10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ，將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul ，置 37 ℃ 暗處反應15 分鐘。

8. 每孔加入100ul 終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測吸光值。

性能：

1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月

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